Aislamiento De Microorganismo De Uso Comun

INTRODUCCIÓN

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. Al conjunto de estas soluciones líquidas o sólidas que contienen los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos se les conoce como medio de cultivo.

El medio de cultivo es aquella solución que cuenta con los nutrientes necesarios para recuperar, multiplicar, aislar e identificar los microorganismos (bajo condiciones favorables de temperatura y pH, exento de todo microorganismo contaminante), así como efectuar pruebas de susceptibilidad.

Los medios sólidos están constituidos por un medió líquido más una solución gelificante, como el agar en polvo que se disuelve por ebullición, que los solidifica. Pueden ser trasvasados en tubos o placas de Petri. Estas últimas son recipientes de vidrio o plástico transparente con una tapa y ofrecen una gran superficie para la siembra.

Los medios básicos contienen las sustancias mínimas para el crecimiento de hongos metabólicamente no exigente. Pueden contener agar o no dependiendo si se quieren solidos o líquidos, respectivamente; peptonas, glucosa. Deben poseer un pH y una osmolaridad adecuada para la multiplicación de los hongos. Estos medios también pueden ser utilizados como base en la preparación de otros medios como los enriquecidos, selectivos, entre otros.

Los medios enriquecidos pueden contener suero, sangre o factores esenciales específicos como vitaminas o cofactores para el crecimiento de hongos exigentes en requerimientos nutritivos y que no crecen bien en los medios básicos.

Para realizar un cultivo fúngico, generalmente los especímenes se colocan sobre la superficie del medio de cultivo y se conservan a temperatura ambiente (26 a 27 ºC); en caso de micosis sistémicas, es mejor a 30-37 ºC.. Las levaduras se desarrollan en 24 a 48 horas, los contaminantes en dos a cuatro días y la mayoría de los hongos patógenos requiere una a dos semanas. (arenas)

La identificación de los hongos se basa en el examen macroscópico de la colonia y en sus características microscópicas. Semejanzas macroscópicas como la forma de la colonia, el color de la superficie, la textura y la producción de pigmentos son muy útiles para la identificación. En los medios de cultivo las levaduras forman colonias húmedas, cremosas, opacas o pastosas, y los hongos filamentosos producen colonias algodonosas, lanosas o pulverulentas.

En general, la morfología microscópica de los hongos es estable y presenta pocas variaciones. La identificación definitiva se basa en la forma característica, método de producción y ordenamiento de las esporas, siendo también importante conocer el tamaño y la disposición de las hifas en el caso de los hongos filamentosos, en los levaduriformes se observa la presencia de blastoconidias, seudohifas, clamidosporas.

MARCO TEÓRICO

Medios de cultivo

Para ela aislamiento de hongos, se utiliza diversos medios de cultivo.Estos medios hay que seleccionarlos en función del hongo que se sospeche y el tipo de muestra.

Los medios de cultivo se pueden utilizar en tubos cerrados con tapon de rosca o en placas Petri. La superficie de estas últimas facilita el aislamiento y la disolución de sustancias inhibidoras en las muestras.

Si la muestra es de zonas contaminadas se debe incluir medios que contengan cloranfenicol y cicloheximida .El primero inhibe los contaminantes bacterianos el segundo inhibe le crecimiento de hongos saprofitos. Hay algunas especies patógenas que pueden ser inhibidos por ambos, por esta razón es importante usar medios con agentes con inhibidores y sin inhibidores. Las muestras de zonas estériles pueden incubarse en medios sin sustancias inhibidoras.

La temperatura de incubación debe de ser seleccionadas teniendo en cuenta el tipo de hongo, en general , los medios deben incubarse a 25ºc a 37ºc durante 4 semanas antes de considerarse como negativos. Si se emplean tubos con tapón de rosaca deben de estar flojos para permitir la entrada de aire.

Medios más utilizados

Agar dextrosado saboureaud con cicloheximida y cloranfenicol: se utiliza para aislamiento e identificación de dermatofitos y cándidas.

Agar dextrosado con cloranfenicol sin ciclohexmida: se utiliza para el aislamiento e identificación de patógenos ambientales y oportunistas.

Agar de harina de maíz: suplementado con tween 80 es para diferenciar distintas especies de cándida y para realizar subcultivos ya que estimula la esporulación de hongos miceliales.

Agar urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e identificar diferentes especies de trichophyton.

La clasificación de los medios de cultivo Según su consistencia son líquidos, semisólidos y los q en este caso se utilizaron SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri .

Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del mundo microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.

Existen los selectivos, comunes o universales, diferenciales y

ENRIQUECIDOS: están compuestos de una media base como apoyo del crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc.

FACTORES FÍSICOS

Temperatura: Cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento ade- cuada. Si estudiamos la variación de la velocidad de crecimiento en función de la tem- peratura de cultivo, podemos observar una temperatura mínima por debajo de la que no hay crecimiento; a temperaturas mayores se produce un incremento lineal de la velo- cidad de crecimiento con la temperatura de cultivo hasta que se alcanza la temperatura óptima a la que la velocidad es máxima. Por encima de esta temperatura óptima, la ve- locidad de crecimiento decae bruscamente y se produce la muerte celular.

OBJETVOS

Identificar hongos filamentosos de diferentes objetos de uso cotidiano

MATERIAL Y EQUIPO

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