Determinacion De Enterobacterias En El Agua

Laboratorio de microbiología N°5

DETERMINACIÓN DE ENTEROBACTERIAS EN AGUA

Introducción

No es desconocido que el agua contiene microorganismos, los cuales al llevar el agua por procesos de potabilización son reducidos a cantidades mínimas, de manera que no puedan causar alguna enfermedad o cuadro de intoxicación en quien las ingiere, pero, ¿qué hay del agua cuando está estancada, o la que va por el desagüe de una casa normal? Bueno pues la verdad bajo estas condiciones se ve propiciado el crecimiento de los microorganismos debido a los nutrientes, temperaturas y cantidad de oxígeno, en cantidades normales de desarrollo para éstos.

Para determinar cantidades de estos microorganismos llamados también coliformes, entre los cuales se encuentran bacterias del género Escherichia, Kleibsella, Enterobacter, Citrobacter, se llevan a cabo una serie de pruebas para determinar el número más probable (NMP) de unidades formadoras de colonias de coliformes, definidos en coliformes totales y fecales; siendo el grupo entero y los que tienen origen fecal, respectivamente.

El método del número más probable describe la presencia o ausencia (positivo o negativo) de los microorganismos en copias distintas a partir de diluciones consecutivas a partir de las muestras, las que en el caso de la experiencia corresponden a agua. Es basado en que una única unidad formadora de colonia puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. Para este método se requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes.

Para llevar a cabo la prueba presuntica de coliformes totales en la muestra se utiliza el caldo Lauril Sulfato Triptosa, cuya acción se basa en que permite el desarrollo de los microorganismos fermentadores de lactosa. La triptosa es fuente de Nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Dicho caldo corresponde a un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompañante. Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, éste último se evidencia al utilizar las campanas Durham.

Para la confirmación de la presencia de coliformes totales es utilizado el caldo de Bilis Verde Brillante (BVB) además de indicar el grado de contaminación de la muestra. La acción de este caldo se basa en que en el medio, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.

Es una propiedad del grupo coliformes, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas la cual es confirmada con la utilización de campanas Durham.

Para la confirmación de coliformes fecales se utiliza el caldo E. coli el cual está basado en que el contenido de lactosa de dicho medio, favorece el crecimiento de bacterias lactosa positivas, mientras que las sales biliares inhiben el crecimiento de gran parte de la flora acompañante. Finalmente son tomadas muestras que se inoculan en agar Levine, para el cual, en caso de confirmarse la presencia de dichos coliformes por su acción de medio selectivo y diferencial adecuado para el crecimiento de enterobacterias. La combinación de los demás nutrientes como eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.

Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-negro, con brillo metálico. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.

Objetivos

• Diferenciar los procedimientos de análisis para coliformes totales y fecales.

• Observar la formación de gas en las pruebas presuntivas.

Materiales

• Mechero bunsen

• Desinfectante

• MuestraA

• Pipetas esterilizadas

• 9 tubos con solución reguladora de peptona

• 9 tubos con caldo Luril Sulfato Triptosa

• 9 tubos con Caldo Bilis Verde Brillante

• 9 tubos con Caldo E. Coli

• Aza loop

• 1 placa con agar Levine

• Estufa de incubación

• Baño termorregulado

Tabla

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