Determjinacion De Monoxido De Carbono - Toxicologia

I. MARCO TEÓRICO

El monóxido de carbono es un gas incoloro, inodoro, insípido y no irritante que se origina durante la combustión incompleta del carbón. Las fuentes productoras más frecuentes son estufas, calefones, hornos, incineradores y automóviles en mal funcionamiento. La toxicidad del monóxido de carbono (CO) se debe a su combinación con la hemoglobina para formar carboxihemoglobina (COHb). En dicha forma la hemoglobina no transporta oxígeno, dado que ambos gases (O2 y CO) reaccionan con el grupo hemo en la molécula tetramérica de la hemoglobina. Sin embargo, la afinidad del monóxido de carbono por la hemoglobina es cerca de 240 veces mayor que por el oxígeno, de esta manera, la intoxicación puede ocurrir aun cuando pequeñas cantidades de CO se encuentren presentes en la atmósfera. Cuando el paciente es removido del ambiente contaminado, la carboxihemoglobina desaparece rápidamente, particularmente cuando el oxígeno es administrado. Solo trazas pueden ser detectadas cuando el paciente alcanza el hospital y de esta manera la medida de carboxihemoglobina es raramente justificada en la clínica toxicológica.

CO +Hb.Fe.O2 <=======> Hb.Fe.CO + O2

La formación de oxihemoglobina (Hb.Fe.O2) como de carboxihemoglobina (Hb.Fe.CO) son reacciones reversibles y dependen principalmente de la presión parcial de los gases y del pH sanguíneo aunque otros factores como la temperatura y la concentración iónica tienen también incidencia. La toxicidad del monóxido de carbono se manifiesta no sólo de la interferencia en el aporte de oxígeno por la sangre sino también ejerce efecto directo al unirse a los citocromos celulares como los presentes en las enzimas respiratorias y la mioglobina. La determinación cuantitativa de la carboxihemoglobina en sangre puede realizarse por métodos espectroscópicos que se basan en los diferentes espectros de absorción que presentan la carboxihemoglobina respecto de la hemoglobina. En todos ellos se realizan medidas de absorción a distintas longitudes de onda de diluciones adecuadas de la sangre en estudio. Estas longitudes de onda corresponden a los máximos, mínimos o puntos isosbésticos de absorción de cada una de las especies de hemoglobina que coexisten en la muestra.

Sin embargo también podemos realizar la determinación de monóxido de carbono en sangre por métodos químicos .Los métodos químicos emplean la propiedad del monóxido de carbono de reducir diversas sales metálicas oxidantes como es el caso del cloruro de paladio , el cual ha sido empleado en esta practica para determinar monóxido de carbono por microdifusión.

II. PARTE EXPERIMENTAL

 Objetivos de la practica:

Manejar la técnica de microdifusion para la determinación cuantitativa de carboxihemoglobina.

Cuantificar el nivel de monóxido de carbono en una muestra de sangre.

 Reactivos

 cloruro de paladio 0,01N

 H2SO4 al 10% (V/V)

 Materiales

 Muestra de sangre

 Agujas

 Vial con anticoagulante

 Cámara de microdifusion de Conway

 Base oleosa hidrosoluble (BOH)

 Pipetas

 Estufa

 Fiola 10 mL

 Técnica operatoria

 Una persona debe fumar un cigarrillo minutos antes de la toma de muestra.

 Extraer de 1 – 2 mL de sangre por punción venosa y colocarla en el vial con anticoagulante.

 Colocar 1 mL de sangre en el compartimento externo de la cámara de Conway.

 Colocar 2 mL de solución de cloruro de paladio en el compartimento interno de la cámara de Conway.

 Agregar 1 mL de H2SO4 10% sobre la sangre.

 Utilizar la base oleosa hidrosoluble para sellar la cámara.

 llevar por 20 min a la estufa a una temperatura de 50º C.

 Pasados los 20 min retirar cuidadosamente de la estufa.

 Extraer con una pipeta el contenido del compartimento externo de la cámara y llevarlo a una probeta.

 Completar en la probeta hasta un volumen de 2 mL

 Llevar a la centrifuga 2000 rpm por 5 minutos

 Tomar 0,1 mL (2 gotas exactas) del sobrenadante y verterlas en una fiola de 10 mL

 Agregar 1 mL de goma arábiga 1% y 1 mL de KI 15%

 Completar el volumen de la fiola con agua destilada.

 Finalmente realizar la lectura de la dilución en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 500 nm.

 Realizar los cálculos.

...