ESTUDIO MORFOLOFIA DE MICRORGANISMOS CON INTERES INDUSTRIAL: OBSERVACION DE BACTERIA

Introduccion

Por su pequeño tamaño las bacterias no resultan fáciles de distinguir al microscopio óptico sin la ayuda de coloraciones específicas. Algunos métodos complejos de coloración dan incluso la posibilidad de diferenciar unas bacterias de otras, y estudiar particularidades de la estructura de las células bacterianas.

Un ejemplo de estos es el desarrollado por Gram en 1884, pero que no ha perdido su valor práctico hoy día. En el caso de este método las bacterias se subdividen en grampositivas y gramnegativas, lo que facilita la realización del diagnostico diferencial de algunas enfermedades infecciosas, así por ejemplo se sane que todos los cocos patógenos, excepto los gono y meningococos, son grampositivos; los vibriones, treponemas y representantes de la familia de las bacterias intestinales –soa-gramnegativos, y todos los bacilos y clostridios son grampositivos.

En el caso de la coloración por este método los microorganismos son sometidos a dos procesos de tinción consecutivos y separados entre si por una decoloración alcohólica. La primera tinción se realiza con el colorante de violeta genciana o violeta de merilo; y la segunda con fucsiana. En este caso los microorganismos granpositivos se tiñen de color violeta y los gramnegativos de color rosado-rojo, lo que esta condicionado por las particularidades de la estructura y la composición química de las células de los microorganismos: en los grampositivos la pared celular consta, en lo fundamental de una capa gruesa de mureina (90%) y acido teicoico, mientras que en los gramnegativos la pared contiene solamente un 5-10% de mureina, no hay acido teicoico y tienen una mayor cantidad de proteínas y lípidos en su pared.

En el transcurso de la coloración, durante el tratamiento con alcohol las bacterias grampositivas cierran los poros de su pared impidiendo la salida del colorante y conservando el color violáceo que las caracteriza, mientras que las gramnegativas de paredes mas finas lo pierden al ser tratadas con alcohol, se decoloran y luego pueden reteñirse con el segundo colorante rosado.

• Identificar y determinar las principales características de las bacterias.

• Reconocer la presencia de bacterias Grampositivas y Gramnegativas.

• Determinar las principales diferencias entre las bacterias Grampositivas y Gramnegativas.

MATERIALES:

Proporcionado por el laboratorio:

• Suspensión de cultivo bacteriano o material biológico fuente de bacterias a examinar.

• Solución de violeta genciana o de violeta de metileno

• Solución de Lugol

• Alcohol al 95%

• Solución Fucsia o Safranina para contrateñir

• 01 goteros

• Pipetas 1ml

• 02 portaobjetos

• 02 cubreobjetos

• 02 microscopios con lente de inmersión

• Aceite de inmersión

MÉTODOS:

Método observativo:

En los pequeños momentos que se tenía libre cada alumno recorría a los demás grupos observando y haciendo los apuntes que creía conveniente de los trabajos que se estaban realizando.

Las muestras de fluidos corporales (por ejemplo, la sangre, la orina, el líquido cerebroespinal) se estrían sobre capas de cultivo y las colonias aisladas de las bacterias (las cuales se observan a simple vista)

Aparecen después de uno o varios días de incubación. Cada colonia consiste de millones de células bacterianas. La observación de las colonias se caracteriza por su tamaño, la textura, el color y (si ha crecido en agar sangre) las reacciones de hemolisis. La morfología colonial es latamente importante como un primer paso en la identificación bacteriana. En caso de que el organismo requiera oxigeno para el crecimiento, esta otra característica es relevante en la diferenciación.

Las colonias se tiñen por la técnica de Gram y las células bacterianas teñidas individualmente se observa bajo el microscopio. Las bacterias se tipifican usando colonias aisladas para sembrar pruebas bioquímicas. Esto a menudo requiere horas adicionales de tiempo de crecimiento.

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