Técnica de extracción de ADN

Técnica de extracción de ADN

Se llevó a cabo la extracción de ADN mediante tres métodos diferentes (técnica de Chelex 100, técnica Fenol-Cloroformo con CTAB y Kit QIAamp DNA Stool) con la finalidad de obtener ADN de buena calidad, ya que el análisis genético a partir de ADN extraído de excretas suele ser complicado, pues generalmente el ADN obtenido se encuentra contaminado con restos propios del material fecal, de la dieta del animal o suele estar en bajas cantidades o degradado (Deuter et al., 1995; Kohn et al., 1995; Mak et al., 2004; Panasci et al., 2011). Encontramos que al utilizar la técnica de Chelex 100, aunque las cantidades de ADN parecían altas, el análisis de pureza indico que este se encontraba con una gran cantidad de contaminantes, lo que hubiera dificultado la amplificación (Palomares et al., 2002), con la técnica de Fenol-Cloroformo con CTAB se obtuvo un menos cantidad de ADN, y aunque igualmente este tenía contaminantes en este observamos ADN no degradado (Ernest et al., 2000), y por último con él kit QIAamp DNA Stool, las cantidades de ADN fueron las menores, pero este posee un buen grado de pureza, lo que nos serviría para obtener amplificaciones exitosas (Farrell et al., 2000) y de acuerdo a los resultados obtenidos, se determinó realizar la extracción con el Kit QIAamp DNA Stool.

Una vez establecido el método de extracción de ADN de las excretas de venado cola blanca, el porcentaje de muestras frescas en las que se obtuvo ADN fue del 94% y de 25% y 45.4% para excretas congeladas y en la amplificación mediante la técnica de PCR en las muestras congeladas este porcentaje se mantuvo, mientras que con las muestras frescas este baja a 52.9%, algo congruente con lo encontrado por Esparza (2007)

Los marcadores moleculares se han utilizado en el manejo de la vida silvestre con anterioridad, con el Águila real se utilizaron microsatélites para estimar la relación genética de poblaciones de Zacatecas con las de Guanajuato y determinar la distribución de los microsatélites en las poblaciones nativas de Zacatecas (Juárez, 2012). Otro de los usos fue para la identificación de sexo en venado cola blanca en vida libre por análisis indirecto mediante la amplificación del gen SRY (Esparza, 2007).

El uso de muestras fecales en estudios moleculares de especies silvestres tiene múltiples ventajas. A diferencia de las capturas, requiere poco personal en el campo, las muestras pueden obtenerse sin perturbar al animal y se pueden transportar fácilmente a temperatura ambiente (Broquet et al., 2007; Green et al., 2007). En la actualidad existen varias técnicas moleculares que nos permiten conocer cómo se encuentran las proporciones de genes en las poblaciones naturales de manera indirecta, como con los análisis de proteínas, o de manera directa con estudios de ADN (Simpson, 1997).

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