Métodos De Desinfección De Tejidos Vegetales

Métodos de desinfección de tejidos vegetales

El cultivo in vitro consiste en cultivar un explante con potencialidad de diferenciación bajo condiciones asépticas en presencia de una dieta balanceada de nutrientes y hormonas. Estas a su vez son condiciones ideales para el crecimiento y proliferación de microorganismos contaminantes, de ahí que podemos imaginar la importancia de los métodos que usemos para desinfectar los instrumentos, la campana de flujo laminar, los cuartos de trabajo y los tejidos vegetales.

Método de desinfección I: Propagación vegetativa in vitro de Puya santossi

Los meristemos caulinares, obtenidos a partir de secciones de cormos, y las láminas foliares de P. santossi se colectaron a partir de plantas que presentaban una longitud entre 10 y 15 cm. Estas plantas se encontraron en los alrededores de la laguna El Verjón, ubicada en el Páramo de Cruz Verde, km 16 vía Choachí, departamento de Cundinamarca.

1: las plantas fueron sumergidas en una solución de Benlate® al 2% durante 12 h

2: posteriormente se realizaron cuatro enjuagues consecutivos con solución jabonosa y agua destilada estéril.

3: Después, los cormos y las láminas foliares se suspendieron en alcohol al 70% durante un minuto.

4: Cada tipo de explante se sumerge en solución de hipoclorito de sodio al 0,5; 1,0 y 1,5% durante 5, 10 y 15 minutos, para un total de 9 tratamientos.

5: Finalmente, se realizan tres enjuagues en agua destilada y estéril.

Método de desinfección II: Establecimiento in vitro de Eugenia squarrosa: una especie endémica de Santa Clara (Cuba) en peligro de extinción

Establecimiento in vitro de Eugenia squarrosa a partir de semilla

1: Se procedió al lavado de las semillas de Eugenia squarrosa con agua y detergente comercial.

2: Posteriormente se les eliminó la testa y fueron desinfectadas con tres concentraciones de NaOCl (2.0, 2.5, y 3.0%) y Tween 20.

Establecimiento in vitro de Eugenia squarrosa a partir de esquejes

1: Se seleccionaron plantas que fueron podadas y asperjadas con una solución compuesta por 1.0 mg.l-1 de 6-BAP.

2: Semanalmente se realizaron dos aspersiones durante cuatro semanas.

3: Transcurrido este tiempo se tomaron brotes jóvenes con dos o tres pares de hojas los cuales fueron lavados con agua y detergente y desinfectados según las variantes siguientes:

a) Alcohol al 70% durante 2 minutos.

b) Alcohol al 70% durante 2 minutos y 10 minutos en NaOCl al 1%.

c) Alcohol al 70% durante 2 minutos, 10 minutos en NaOCl al 2%.

d) Alcohol al 70% durante 2 minutos, 10 minutos en NaOCl al 3%.

Métodos de desinfección III: Estandarización del protocolo de desinfección de disco de hoja en la inducción de callogénesis de Cordia alliodora (ruiz & pav.) okén (lamiales: boraginaceae) en condiciones in vitro

Se trabajaron tres protocolos de desinfección utilizados en algunas especies vegetales. Para todos los protocolos aplicados, se utilizaron hojas en estado juvenil

Protocolo de desinfección según López (2007)

1:Las hojas se lavaron con detergente comercial y abundante agua de grifo.

2: luego con la ayuda de un bisturí, se seccionaron los discos de hoja de aproximadamente 1cm2.

3: posteriormente fueron lavados con agua destilada.

4: consecutivamente, los explantes fueron puestos en una solución al 2% (0.5 ml/ 100ml de agua) del fungicida- bactericida comercial KASUMIN durante 20 min.

5: Luego fueron llevados a la cabina de flujo laminar donde se sometieron a lavados con NaClO al 2%, por dos tiempos diferentes de exposición: 5 y 10 minutos.

6: posteriormente se realizaron tres enjuagues con agua destilada estéril, para ser inoculados en los recipientes que contenían el medio de cultivo.

Protocolo de desinfección según Marulanda e Isaza (2004)


El presente protocolo sugirió realizar una pre desinfección donde:

1: Los explantes se lavaron con 200 ml de agua de grifo más jabón detergente de uso comercial y 100 ml de NaClO al 1%, por 10 min.

2: posteriormente se realizó un lavado con abúndate agua del grifo hasta que desapareciera cualquier residuo visible del detergente utilizado.

3: A continuación los explantes fueron llevados a la cabina de flujo laminar donde fueron puestos en alcohol al 70% durante un minuto.

4: Luego se realizaron tres enjuagues con agua destilada y se dejaron 15 min en una solución de NaClO al 3%.

5: se hicieron tres enjuagues con agua destilada estéril y se sometieron nuevamente los explantes durante 5 min en una solución NaClO al 1%.

6: A continuación se hicieron tres enjuagues con agua destilada estéril.

7: Adicionalmente, al protocolo anterior se le realizó una modificación, dando como resultado un cuarto tratamiento, donde sometieron los explantes en la segunda solución de NaClO a mayor tiempo de exposición, durante 10 min, para posteriormente ser inoculados en el medio de cultivo.

Protocolo de desinfección según Ramírez et al. (2002).

1: Los explantes fueron tratados con las dosis de 0.5, 1 y 2% de NaClO (Cloro comercial: hipoclorito de sodio al 5,25%), tomando cada dosis en tratamientos diferentes, a dos tiempos de exposición: 5 y 10 min.

2: Posteriormente, se realizaron tres enjuagues con agua destilada estéril.

3: se llevaron a medio de cultivo.

BIBLIOGRAFÍA

Revista Colombiana de Biotecnología,

ISSN (Versión impresa): 0123-3475 revcbib_bog@unal.edu.co Universidad Nacional de Colombia Colombia

Puya santossi in vitro propagation

Jaime Alonso Pedroza–Manrique1, Andrea Bejarano-Tibocha2. Biólogo, Esp. M. Sc. Profesor Asociado Universidad Distrital Francisco José Caldas, Facultad de Ciencias y Educación. Colombia. jpedroza@udistrital.edu.co

Biotecnología Vegetal Vol. 4, No. 1: 49 - 53, enero - marzo, 2004

Establecimiento in vitro de Eugenia squarrosa: una especie endémica de Santa Clara (Cuba) en peligro de extinción

Elisa Quiala1*, Grecia Montalvo2, Jesús Matos2, Reynaldo Mederos2, Yelenys Alvarado1, Manuel de Feria1, Maité Chávez1. * Autor para correspondencia.

1Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad Central “Marta Abreu” de Las Villas. Carretera a Camajuaní km 5 ½. Santa Clara. Villa Clara. Cuba. CP 54 830 e-mail: elisa@ibp.co.cu

2Empresa Nacional para la Protección de la Flora y Fauna. Villa Clara. Cuba.

Rev. Invest. Univ. Quindío (20): 120 - 125. Armenia – Colombia Estandarización del protocolo de desinfección de disco de hoja en la inducción de callogénesis de Cordia alliodora (ruiz & pav.) okén (lamiales: boraginaceae) en condiciones in vitro

Rodolfo Lopez franco, Cesar Ivan Murcía Rincon, Paola Andrea Lopez Mora, Jenny Carolina Valancia Rincon. Laboratorio de Biotecnología adscrito al CIBUQ. Universidad del Quindio Armenia Colombia, Facultad de Ciencias básicas. Univerisdad de Quindio.

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