Medios De Cultivo

Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

Incubación

A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados

1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.

2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.

3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.

5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.

Microorganismo Pico/Fondo Producción de gas Producción deácido sulfhídrico

E. coli ATCC 25922 A/A + -

K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -

P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +

S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +

S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +

S. flexneri ATCC 12022 K/A - -

P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -

A: ácido

K: alcalino

Características del medio

Medio preparado: rojo

Almacenamiento

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Medio preparado: a 2-8 ºC. El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:

1. Fermenten o no glucosa.

2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.

3. Produzcan o no ácido sulfhídrico.

4. Produzcan o no gas.

Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:

1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecerá de color rojo.

2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidificará el medio en su

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