Metodos Y Tecnicas Para El Desarrollo De Hongos

Métodos y técnicas para el desarrollo de hongos

- EXAMEN MICROSCÓPICO.- El exámen microscópico de los hongos en las muesras clínicas o de los cltivos se efectúa previa tinción o directamente en fresco.

Los hongos se observan en nuestras clínicas teídas con la tinción de Gram como grampositivos. También se visualizan bien contrastando las muestras con una gota de azul de lactofenol. En productos fluidos en los que se sospecha la existencia de levaduras capsuladas, como el criptococo, puede depositarse en el prota una gota de material, y añadir una gota de tinta china, lo que permite observar la levadura con la cápsula.

Muchas veces el examen microscópico de las micosis de los tejidos y órganos profundos se hace por técnicas histológicas a partir de biopsias. La hematoxilina-eosina se útil para examinar las lesiones inflamatorias que, en ciertas ocasiones, orientan el diagnóstico, pero no permite la detección de elementos fúngicos, que se tiñen mal por esta técnica. La tinción de PAS colorea intensamente la pared polisacárida de los hongos y permite na detección rápda de los elementos fúngicos en los tejidos. Las tinciones argénticas permiten igualmente reconocer los elementos fúngicos ya que la pared se tiñe en negro. En los tejidos de los hongos pueden observarse como levaduras aisladas, o como filamentos ramificados infiltrantes.

- CULTIVO.- Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgánicco, generalmente azúcar, y de nitrógeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte sólido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelo aéreo, donde se localizan las estructuras resproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo más utilizado para los hongos es el medio de Saouraudm que reúne estas características y un pH de 5,6, que dificulta el crecimiento bacteriano.

No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser cultivados en el medio de Saboureaud, la mayro parte de medios de cultivo utilizados en basteriología permiten su desarrollo, pero su utilización está consagrada por la costumbre. De hecho, la mayoría de las descripciones de crecimiento y características morfológicas de las colonias fúngicas se han hecho sobre el medio Saboureaud.

La adición al medio de antibióticos como el cloranfenicol o la gentamicina,, que inhiben el crecimiento bacterias contaminantes, o antifúngicos especiales (como la actidiona o cilohexamida) que inhiben el crecimiento de uchos hongos no patógenos, transforman al medio de Sabouraud en un medio más selectivo.

Los medios de cultivo espués de sembrados, se incuban en aerobiosis y la temperatura óptima suele ser 25-30 ºC para los que preducen infecciones prefundas.

Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfologá similar a las basterias. El desarrollo de las colonias de os hongos filamentosos es mucho más variable; algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy características y en general se diferencian fácilmente de las levaduras.

Medio de cultivo Sabouraud.

Medios para aislamientos especiales:

Medio de patata: T.rubrum Añadiendo zanahoria y bilis (Cándida albicans) o glucosa (Tricophyton rubrum).

Medio de arroz: Microsporum auduinii

Medio Czapek: Aspergillus spp.

Medio de alpiste: Criptococcus neoformans.

Medio Chromagar Candida: Cándida spp.

- IDENTIFICACIÓN.- Un hongo se identifica en primer lugar por la morfología macroscópica de la colonia, color, textura y velocidad de crecimiento. Para observar la estrucutra microscópica puede tomarse un pequeño fragmento de cultivo y montarlo entre cubre y porta, en fresco o contrastado con un colorante para su posterior observación, lo que permitirá confirmar la sospecha de hongo levaduriforme o filamentoso basada en la morfología colonial.

Los hongos filamentososo se identifican a nivel de género especie por la morfología del micielo, pero sobre todo por las características microscópicas de sus esporas

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