OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES DE AGUA CONTAMINADA FRESCAS Y TEÑIDAS

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR

PRÁCTICA 3.

OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES DE AGUA CONTAMINADA

FRESCAS Y TEÑIDAS

OBJETIVOS:

1. El alumno observará y aprenderá el uso adecuado del microscopio en preparaciones frescas y teñidas.

2. Aplicará algunas técnicas de tinción simple y diferencial sobre muestras biológicas de aguas contaminadas.

3. Será capaz de discernir entre las células procariontes y eucariontes en base al tamaño y tipo de tinción empleado.

INTRODUCCIÓN:

La teoría celular, establece que todos los seres vivos están constituidos por células y que toda célula proviene de una preexistente. En efecto, desde los minúsculos microorganismos hasta las inmensas ballenas azules están formadas por células. Sin embargo, la estructura de las mismas puede ser muy diferente. Ahora analizaremos los dos modelos de organización celular que existe en la naturaleza: las células procariotas y eucariotas.

Durante los primeros dos mil millones de años los únicos habitantes de la Tierra fueron exclusivamente las bacterias.

En realidad, tan importantes son estos microorganismos bacterianos, y tan importante es su evolución, que la división fundamental de los seres vivos en la Tierra no es la tradicionalmente supuesta entre plantas y animales, sino entre procariotas y eucariotas.

Animales, plantas, hongos, protozoos y algas, todos poseen células de tipo eucariota. Sólo las bacterias (Eubacterias y Archaebacterias) tienen células de tipo procariota. La diferencia más notoria entre las células procariotas y eucariotas es la presencia, en estas últimas, de membranas internas que delimitan espacios, cada uno con características y funciones diferentes.

Las células procariotas tienen el ADN en el citoplasma y no en un núcleo como las eucariotas, de allí el nombre de cada tipo celular. Esta compartimentalización hace que las células eucariotas puedan realizar sus procesos de una manera más eficiente y segura, pudiendo aumentar también su tamaño.

La célula eucariota es visible en el microscopio óptico compuesto mediante tinciones simples, diferenciales y especiales en los objetivos denominados “secos”. La célula procariota puede observarse con tinciones simples, diferenciales y especiales con el objetivo de inmersión.

La composición química de los organismos presenta una gran proporción de moléculas de agua en las células de los diversos tejidos. En la mayoría de ellos este fluido predomina y sólo en algunos su concentración es baja. Esta características es un factor muy importante para la observación microscópica, ya que debido a la refringencia del agua se dificulta observar los componentes estructurales de la célula. Para evitar este fenómeno se recurre a las técnicas de coloración; los colorantes tienen como función teñir los diferentes componentes celulares y tisulares para facilitar el observarlos. En biología son conocidos los primeros investigadores que usaron los colorantes. Se menciona entre ellos a Hill, quien en 1770 empleó el carmín; Ehrember utilizó en 1938 el índigo carmín, aplicándolo a organismos vivos. Sin embargo, ya en 1807 Schwarts introdujo la doble tinción utilizando el carminato de amonio y el ácido pícrico. Durante varios años las técnicas se limitaron al uso de estos colorantes, hasta que varios años después se descubrieron las anilinas, con las cuales las técnicas de coloración recibieron gran impulso. Los primeros investigadores que utilizaron las anilinas fueron: Beneke, en 1862, que usó la anilina violeta, y Waldeyer, en 1863, que empleo la fucsina.

MATERIAL:

- Frasco con agua contaminada.

- Goteros (4 de 25 mL por grupo).

- Portaobjetos (6 por equipo).

- Cubreobjetos (6 por equipo).

- Equipo para tinción de Gram que incluye cristal violeta (15 mL por grupo), lugol (15 mL por grupo), alcohol etílico (96%) (25 mL por equipo) y safranina (15 mL por grupo).

- Colorante simple (azul de metileno, verde malaquita o fucsina ácida) (15 mL por grupo).

- Aceite de inmersión (5 mL por grupo).

- 2 pipetas de 1 mL por equipo.

- Microscopio óptico compuesto (1 por equipo).

- 1 mechero bunsen por equipo

- Trapo de limpieza (personal).

METODOLOGÍA:

1. Limpiar y enfocar el microscopio.

2. Agitar la muestra de agua contaminada y tomar una pequeña gota de ésta. Colocarla en un portaobjetos e inmediatamente colocar encima un cubreobjetos.

3. Observar movimiento y forma de las células con los objetivos de 10x, 40x y 100x. No observar si el agua se secó.

4. En otro portaobjetos, añadir una pequeña gota de la muestra de agua y dejar secar. Esta laminilla será teñida con colorante simple. Esto se realizará colocando la laminilla con la muestra fijada al aire en las barras de vidrio colocadas en las tarjas del laboratorio. Añadir el colorante simple a la superficie de la laminilla cuidando que el colorante no caiga de la laminilla y dejar reposar por 30 segundos. Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio.

5. En la tercera laminilla de pondrá una muestra proveniente de un cultivo bacteriano, se fijará con calor y será teñida con la técnica de Gram, que consiste en lo siguiente:

a) Añadir cristal violeta y dejar reposar por un minuto. Enjuagar con agua de la llave.

b) Añadir lugol y dejar reposar por un minuto. Enjuagar con agua de la llave.

c) Decolorar con alcohol por 30 segundos y enjuagar.

d) Añadir safranina y dejar reposar por 30 segundos. Enjuagar, dejar secar y observar al microscopio.

ACTIVIDADES.

1. Haga una descripción breve de los diferentes tipos de tinción existentes.

Tinción Simple:

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