Ciencia / Revision De Métodos Espectrofotometricos Y Elaboración De Curva Estándar De Proteína.

Revision De Métodos Espectrofotometricos Y Elaboración De Curva Estándar De Proteína.

Ensayos y Trabajos: Revision De Métodos Espectrofotometricos Y Elaboración De Curva Estándar De Proteína.
Ensayos de Calidad, Tareas, Monografias - busque más de 1.862.000+ documentos.

Enviado por:  Ensa05  08 junio 2011
Tags: 
Palabras: 1229   |   Páginas: 5
Views: 1181

...

enólico de tirosina, el indol de triptófano y el sulfhidrilo de cisteína. El resultado es una sal reducida tipo molibdeno, de color azul. La mayoría de las proteínas contienen poco Trp o Cys por lo que el color depende mayormente de la cantidad de Tyr presente en la proteína. La adición de Cu2+ intensifica el color azul 10X

Absorción de luz ultravioleta: Se puede realizar a 280 nm (banda de aa aromáticos) o a 205 nm (banda de enlace péptido)

A 280 nm la absorbancia dependerá de la cantidad de Tyr o Trp presente en la proteína: si no tiene estos residuos, el coeficiente de extinción será de E280=0.0

Lisosima, que tiene muchos Tyr y Trp, E280=2.65.

Si se conoce la corrección en la absorción (A280/A260) se puede calcular la concentración de proteínas:

[prot] (mg/ml) = A280-A260

A 205 nm se ve menos el efecto de los residuos, pero siempre hay que corregir para el contenido de Trp y Tyr, y la absorción de las hélices alfa y hojas beta

Ensayo de Bradford : El tinte azul de Coomasie 250 tiene absorción máxima a 465 nm. Al unirse a proteína absorbe a 595nm

Bis-cinchoninic Acid Reagent (BCA): Basado en la rx de Folin-Ciocalteau.:

Proteína + Cu2+ alcalino Biuret complex

(Cu2+Cu1+) Cu1+ + ácido

bis-cinconínico complejo que absorbe a 562 nm

Cuantificación de proteínas por un método colorimétrico: cuando a un péptido o proteína en disolución básica se le hace reaccionar con cubre se forma un compuesto colorido por coordinación entre los nitrógenos del péptido con el ion metálico.en el método de Lowry el reactivo de Folin-Ciocaulteu se añade para incrementar la cantidad de color desarrollado. El aumento en el color ocurre cuando el complejo de cobre tetradentado transfiere los electrones al complejo fosfomolibdato/fosfotungstato, reacción que produce una coloración azul que se lee a 750 nm. La reducción del reactivo de Folin-Ciocaulteu ocurre solamente con los residuos de tirosina y triptófano de la proteína.

Resultados:

Gráfica 1: Determinación

de proteínas por método de absorción a 280 nm

[pic]Gráfica 2: Determinación de proteínas por método de Lory a 750 nm.

[pic]

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA POR ABSORBANCIA A 280 nm

|Y |= |m |x |+ |b |

|A |= |(b |[PROTEÍNA (g] |+ |a |

[pic]

[pic]

DETERMINACIÓN POR EL MÉTODO DE LOWRY

[pic]

[pic]

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE LAS SOLUCIONES STOCK

[pic]

[pic]

Análisis de Resultados:

La curva de calibración es la representación gráfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentración (eje de abcisas).

Se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determinan sus A, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentración se averigua por interpolación de las A de las soluciones problema en la curva de calibración.

Hay que tener en cuenta la linealidad, que es el intervalo de concentraciones del cromógeno entre las ...



Suscríbase a ClubEnsayos

Suscríbase a ClubEnsayos - busque más de 1.862.000+ documentos