Bioquimica

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CQU-310

CUANTIFICACION DE PROTEINAS

INTRODUCCION

La espectrometría permite calcular la concentración de una sustancia en solución basándose en la capacidad de las moléculas de absorber luz.

Esta capacidad depende de las características químicas de cada sustancia específica y de la concentración de la misma en la solución. Siendo este último demostrado por la ley de Lambert y Beer, según la cual mientras mayor sea la distancia que recorre la luz y la concentración de la muestra a examinar mayor será la absorbancia de esta.

De esta manera la ley de Lambert y Beer se expresa:

A=E * I *C

A= absorbancia de la solución.

E= coeficiente de extinción.

I= espesor de la solución en, la cubeta y celda.

C=concentración de la muestra en solución.

Es el espectrofotómetro es el instrumento q nos permite realizar esta técnica, el cual procede de una fuente de luz propia, un selector de longitud de onda, de recipientes para almacenar la muestra, y para su circuito un receptor, el cual mide la diferencia entre la luz incidente y la q traspasa la muestra, además utiliza una muestra blanco como referencia de absorbancia cero.

A través de lo anteriormente descrito podemos realizar procesos como la cuantificación de proteínas, (realizadas en el laboratorio), permite el diagnóstico de enfermedades y para conocer las actividades específicas de estas.

Existen múltiples formas de realizar este procedimiento dependiendo de la naturaleza de la muestra, de la exactitud que se requiera, y el empleado en el experimento fue el de Lowry, el cual requiere una proteína que contenga tirosina, cuyos grupos hidroxifenilo reaccionan con el reactivo folin oxidándose, y tornando de un medio de color azul cuya intensidad depende de la concentración de la proteína, este método consiste en dos etapas: 1° reacción previa de la proteína en medio alcalino con iones de cobre, y 2° reacción de reducción del reactivo de folin.

OBJETIVOS

• Conocer en que consiste la espectrofotometría.

• Conocer y comprender métodos de cuantificación de proteínas.

• Comprender el método de lowry

• Determinar la concentración de albumina mediante el método de cuantificación de lawry.

MATERIALES Y METODOS

• 3 Pipetas,( ya que los reactivos no deven ser mezclados)

• Propipetas

• Vasos precipitados

• Horno

• Espectofotometro

• 7 Tubos de ensayo

• Pizeta.

• Calculadora

• Gradilla

REACTIVOS

• Reactivo de cobre alcalino

• Reactivo de folin

• Albumina de bobino.

Estándar Volumen Bsa ml Volumen H2o ml Volumen Rca ml Volumen Folin ml

blanco 0 1 1 4

1 0.1 0.9 1 4

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