Medios De Cultivo In Vitro De Orqudeas
Enviado por 19940826 • 6 de Diciembre de 2012 • 1.256 Palabras (6 Páginas) • 874 Visitas
http://www.actiweb.es/modbioveg/archivo4.pdf
http://ocw.uniovi.es/file.php/57/practicas/Cuaderno_Pract_Biotec_11_OCW.pdf
El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal en
recipientes que lo separan del ambiente exterior y lo mantienen en condiciones controladas
y asépticas. Entre las diversas técnicas de cultivo in vitro, la micropropagación consiste en
la producción clonal de vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantos nodales de
una planta madre. La gran producción de nuevas plantas se ve favorecida gracias al rápido
crecimiento del material vegetal in vitro y a la proliferación de tallos durante los
subcultivos.
Etapa 0: Selección y acondicionamiento de la planta madre
Etapa I: tratamientos de asepsia y establecimiento del cultivo mediante
Etapa II: Desarrollo y multiplicación de los brotes
Etapa III: enraizamiento o acondicionamiento de los brotes para su
aclimatación a condiciones ex vitro.
Etapa IV: Aclimatación a condiciones ex vitro.
1.1.- MEDIOS DE CULTIVO
Antes de realizar la asepsia del material vegetal que se va a introducir in vitro, es
necesario disponer de Medios de Cultivo esterilizados y dosificados en recipientes
adecuados. Una parte importante del cultivo in vitro son los Medios de Cultivo ya que en
ellos se encuentran las sustancias necesarias para el crecimiento y desarrollo de los tejidos
vegetales. Un medio de cultivo es una solución acuosa en donde se encuentran disueltas
sales minerales que aportan los elementos esenciales Macronutrientes (N, P, K, S. Ca y Mg)
y Micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y Co). Normalmente es imprescindible una fuente
de carbono, generalmente la sacarosa, debido a la escasa actividad fotosintética de los
tejido in vitro. Además, el medio puede ser enriquecido con Aminoácidos, Vitaminas y
Reguladores del Crecimiento.
Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100 veces
(Soluciones Madre o Stock). En la solución madre se pueden mezclar varias sales minerales
siempre que no se produzcan problemas de precipitación. Algunos elementos, como el Fe,
se utilizan en forma de quelatos para mantener su disponibilidad durante el cultivo.
Los medios de cultivo se pueden utilizar de forma líquida o con un agente gelificante
como el agar.
1.1.1.-MEDIO DE CULTIVO DE MURASHIGE Y SKOOG.
El Medio de Cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) se realiza con las siguientes
sustancias:
1.1.1.1.- ELABORACIÓN DE SOLUCIONES MADRE DEL MEDIO DE CULTIVO MURASHIGE Y SKOOG
Para la realización del medio de cultivo MS se elaboran las siguientes
soluciones Madre:
Soluciones stock de nutrientes:
⁻ Stock de macronutrientes,
⁻ Stock de Calcio,
⁻ Stock de micronutrientes
⁻ Stock de hierro y EDTA,
Soluciones Stock de vitaminas
Soluciones Stock de Reguladores
Todas las soluciones se preparan sobre un 70% de agua del volumen final
deseado, y sobre ella se van añadiendo uno por uno todos los componentes hasta
su completa disolución. Posteriormente se ajusta el volumen final con agua y se
almacenan.
Usar 100 ml de la solución stock de
macronutrientes para preparar 1 L demedio de cultivo MS.
Usar 100 ml de la solución stock de Ca para
preparar 1 L de medio de cultivo MS.
Usar 10 ml de la solución stock de
micronutrientes para preparar 1 L
de medio de cultivo MS.
Stock de Fe-EDTA( x100)
El hierro se puede añadir quelado como producto comercial (por ejemplo,
Secuestrene) o preparando el siguiente stock:
1. Disolver 3,72 g de EDTA disódico en 900 mL de agua destilada. Se obtendrá
una solución clara a los 15 min a temperatura ambiente (25 - 27ºC).
2. Añadir 2,78 g de sulfato ferroso heptahidratado. Se obtendrá inmediatamente
una solución de color amarillo claro.
3. Enrrasar a 1 L y almacenar la solución de hierro quelado en una botella
ambar
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