Separación De Los Pigmentos De La Hoja De Espinaca Mediante Cromatografía En Capa Fina

Momentos de Ciencia, 2014

Separación de aminoácidos por cromatografía en capa fina.

Alexis Felipe Rojas-Cruz1,*, Jonathan Navarro-Santanilla1,*, Karen Viviana Ortiz-Duero1,*, & Yedmi Carolina Muñoz-Castro1,*

1 Facultad de Ciencias Básicas. Programa de Biología. Universidad de la Amazonia. Florencia (Caquetá). Colombia.

Recibido de 2014 __________________________________________________________________

Resumen

Para realizar el análisis y la separación de los aminoácidos, se llevó a cabo un estudio general de la cromatografía en capa fina de adsorción solido-liquido, que se desarrolló en el laboratorio de Química Orgánica de la Universidad de la Amazonia (Florencia, Caquetá). Esta técnica consistió en preparar la fase estacionaria, la cual se depositaron doce puntos específicos, incluyendo la muestra extraída del cilantro (Coriandrum sativum) en un adsorbente sólido, donde se introdujo en un tarro cerrado contenido de una fase móvil liquida que fueron varias mezclas de disolventes. Todas estas sustancias presentaron un grado diferente de solubilidad, ya que las más solubles se desplazaron a mayor velocidad, mientras que las menos solubles avanzaron con más lentitud de la fase estacionaria; dependiendo del desplazamiento, se calculó el coeficiente Rf de cada uno de los puntos y se logró determinar el pigmento de mayor presencia en los diferentes puntos. El desplazamiento de los compuestos, es debido a las propiedades físicas y químicas de las moléculas, tales como la solubilidad y polaridad. © 2014 Universidad de la Amazonia. Todos los derechos reservados.

Palabras clave: Cromatografía, disolvente, polar, apolar, pigmentos, fase móvil, fase estacionaria, Rf

Introducción

El uso de la cromatografía en papel para la separación e identificación de aminoácidos es de gran importancia desde que fue introducida por Martin en 1944. (Abbott D. Y Andrews R. S. 1970).

La fase móvil empleada generalmente es una mezcla de n‐butanol/ácido acético/agua o dilución acuosa de fenol (polar y ácida), será por lo general menos polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad serán los menos polares. (Monerri, C. y J.L. Guardiola. 1992). La fase estacionaria será un componente polar adsorbente sólido. (James, W.O. 1967). Se aplica un pequeño volumen de la muestra cerca de uno de los extremos de una hoja de papel filtro. Este tipo de cromatografía puede ser ascendente, en la que el papel se sujeta a la parte superior de la cámara y se sumerge en el solvente, que se encuentra en el fondo, entonces el solvente se mueve hacia arriba por capilaridad. Al realizarse la separación, los solutos de la mezcla original migran a lo largo del papel con diferentes velocidades, dependiendo de la solubilidad en el solvente. La relación de migración de una sustancia Rf, (Figura 1), puede expresarse de acuerdo con la siguiente fórmula (1) (Gonzales et al, 2008)

R=(distancia recorrida por la muestra)/(distancia recorrida por la mezcla eluyente)

Figura 1. Placa donde muestra los puntos de desplazamiento para calcular el Rf 1

Rf= 2,1/2,8=0,75

La cromatografía es una técnica que permite la separación de moléculas pequeñas como lípidos, nucleótidos, vitaminas, fármacos y aminoácidos; debido a que cada sustancia exhibe un valor Rf particular, es posible separar aminoácidos y péptidos, ya que estos presentan características particulares, de solubilidad, polaridad y tamaño, por la composición química de sus grupos R (Koolman & Roehm, 2005).

Esta práctica se realizó con la finalidad de efectuar la extracción de diversos compuestos de materiales vegetales utilizando los solventes apropiados, buscando separar los aminoácidos presentes en un homogenado de tejido vegetal, para identificar las diferencias presentes, a través de los Rf que se obtienen de las muestras en la clasificación según su forma de separación en el sistema cromatográfico.

Metodología

En la presente práctica se llevó a cabo una cromatografía de reparto, en capa fina, para la separación de aminoácidos. En la cromatografía de reparto los componentes de una mezcla se separan en base a una distribución diferente entre la fase móvil y la fase estacionaria.

Para el desarrollo de esta práctica se empleó 0,5g de cilantro, luego se homogenizo en un mortero con 10ml de solución salina fisiológica, después se filtró a través de papel. Seguidamente, se saturo la cámara con 20 ml de solvente, luego se aplicó

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