Pruebas De Sensibilidad Microbiana

RESÚMEN

Se realizaron pruebas de sensibilidad microbiana empleando aceites esenciales de citronela, geranio y eucalipto; y a su vez el antifúngico nystatin para determinar su potencia antibiótica al inhibir el crecimiento de la cepa de Aspergillus niger; Prueba para que se empleó el método de antibiograma. Que según las pruebas realizadas presentó sensibilidad a los antibióticos ordenados de mayor a menor sensibilidad: Citronela, Nystatin, Geranio y Eucalipto.

INTRODUCCIÓN

El antibiograma es un método de estudio in vitro del comportamiento de los antimicrobianos (antibióticos y quimioterápicos) frente a los agentes infecciosos. Tiene como finalidad proporcionar información útil para la iniciación y marcha de la terapéutica antiinfecciosa. Con los resultados obtenidos en el antibiograma clasificamos las bacterias en: sensibles, moderadamente sensibles y resistentes a un determinado antimicrobiano. La información que proporciona un antibiograma es valiosísima, aunque no basta para el establecimiento de una terapia adecuada si se considera aisladamente y se aplica sin tener en cuenta las peculiaridades del antimicrobiano. (GARCÍA; PAREDES; FERNÁNDEZ - 1994)

Un aceite esencial es una mezcla volátil de compuestos orgánicos, generalmente líquidos (aunque pueden ser semisólidos o sólidos), de apariencia oleosa, derivado de las plantas odoríferas por métodos físicos. Los aceites esenciales son utilizados por su atractivo olor, algunos de ellos son valorados por su acción antibacterial y fungicida, solventes de pinturas o incluso como repelentes de insectos. (GUARNIZO; MARTÍNEZ - 2000), Un antiséptico es una sustancia que ayuda a reducir las posibilidades de presentar una infección. La mayoría de los aceites esenciales cuentan con propiedades antibacteriales, antimicóticas y antivirales. Dado que cada aceite esencial es una mezcla de diversas sustancias químicas naturales, los efectos antisépticos se incrementan (ellasabe.com - 2014); Nystatin es un antifúngico utilizado para matar hongos sensitivos a este producto, en medicina es empleado para tratar infecciones de hongos en la piel y mucosa. (drugs.com - 2014)

MATERIALES Y MÉTODOS

Para realizar las pruebas de sensibilidad microbiana se debe utilizar cuatro cajas Petri estériles de vidrio vacías, distribuir en cada una de ellas 12 discos de celulosa de 5mm de diámetro usando unas pinzas estériles, distribuir cada caja de tal manera que una sea para cada aceite esencial (citronela, geranio y eucalipto) de ISABRÚ y finalmente para el antifúngico nystatin, posteriormente agregar a cada disco 20µl de cada una de las muestras previamente mencionadas utilizando una micropipeta; tomar las doce cajas Petri con medio PDA (Papa-Dextrosa-Agar) y asignarles números continuos del 1 al 12, luego distribuir en cada caja cinco puntos e forma de cruz etiquetándolos del 1 al 5, a cada uno de estos se le asignará las muestras de la siguiente manera: 1-control; 2-citronela; 3-geranio; 4-eucalipto; 5-nystatin. Al culminar el etiquetado se procederá a inocular las esporas de la cepa de A. niger por medio del procedimiento de difusión en placa empleando, un difusor de vidrio triangular con un inóculo de 100 µl de dilución de la cepa, esparciéndolo sobre todo el agar; Introducir con la ayuda de las pinzas estériles los 5 discos con las distintas muestras de antibiótico en los puntos señalados previamente, presionándolos de tal manera que se evitará el desplazamiento o caída de alguno de estos. Dejar incubar un tiempo de 48 a 72 horas en la incubadora a una temperatura óptima para el crecimiento, aproximadamente 28°C. Tomar fotos para poder medir los halos de inhibición en relación al diámetro de la caja Petri.

NOTA: todo este procedimiento debe realizarse a manera estéril, con las medidas necesarias y empleando una cámara de flujo laminar.

Tabla #2: Datos obtenidos de Halos de inhibición

# CAJA # MUESTRA HALO EN 48

HORAS (cm) HALO EN 72

HORAS (cm)

1 1 0 0

2 1.80 1.65

3 1.29 1.32

4 0.72 0.66

5 1.65 0.65

3 1 0 0

2 1.69 1.46

3 1.1 1.11

4 1.03 1.04

5 1.76 1.73

5 1 0 0

2 2.52 2.38

3 1.94 2.09

4 0.65 0.65

5 1.75 1.73

6 1 0 0

2 3.2 3.14

3 2.33 2.11

4 0.93 0.75

5 1.2 1.23

7 1 0 0

2 2.41 2.31

3 1.24 1.19

4 0.98 1.12

5 1.96 2.25

8 1 0 0

2 2.23 1.80

3 1.59 1.39

4 0.83 0.76

5 1.85 1.87

10 1 0 0

2 2.18 2.22

3 1.73 1.89

4 0.77 1.43

5 1.54 1.56

Elaborado por: Nicole Vásconez

Fuente: Laboratorio de Microbiología industrial

Tabla #3: Media de medias para cada muestra, desviación estándar y calificación.

MUESTRA MEDIA (cm) DESV. ESTÁNDAR (cm) CALIFICACIÓN

1 – CONTROL 0 ±0 -

2 – CITRONELA 2.22 ±0.49 +++

3 – GERANIO 1.59 ±0.39 ++

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