Cebolla Mitótica

Metodología

Se utilizaron meristemos de raíces de cebolla obtenidos a partir de crecimiento de cebollas en agua, durante 3 a 4

días, a temperatura ambiente [9]. Las muestras se procesaron de acuerdo con técnicas estándar para microscopía

electrónica, se tomaron los meristemos de la raíz de cebolla y se fijaron con glutaraldehído al 6% en amortiguador

PBS a pH 7.2 durante 16 horas. Las muestras después se lavaron con PBS y se postfijaron con tetraóxido de osmio al

1% durante varias horas. Posteriormente se enjuagaron y se deshidrataron en una serie de etanol a concentraciones

graduales, finalizando con óxido de propileno. La preinclusión se llevó a cabo con una mezcla de óxido de propileno

y resina epóxica, en proporción 1:1 durante 16 horas. Finalmente las muestras se incluyeron en resina epóxica

durante 16 horas a 60oC. Se obtuvieron cortes semifinos de unos 200 nm de espesor, con una cuchilla de vidrio y

utilizando un ultramicrotomo marca Leica, modelo Ultracut. Los cortes se montaron al calor sobre portaobjetos de

vidrio y se tiñeron con azul de toluidina. Otros cortes se montaron sobre portaobjetos y no fueron teñidos.

Los cortes semifinos teñidos o sin teñir se observaron con un microscopio de fuerza atómica modelo BioScope

(Digital Instruments, Santa Barbara CA, USA) operando en modo de contacto y zapping con un controlador

Nanoscope IIIa. El microscopio trabaja sobre un microscopio invertido Diaphot 200 (Nikon). Se utilizó un scanner

de 100 μm y puntas de nitruro de silicio de 20-50 nm de radio de curvatura (modelo NP). Se utilizaron velocidades

de barrido de entre 1.969 a 1.285 Hz, una fuerza de 10 nN y una ganancia de 0.5 unidades arbitrarias [10].

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