Curva Estándar

Cuantificación de proteínas totales por el método de Bradford.

Curva Estándar

Tabla 1. Protocolo tipo para la cuantificación de proteínas por el método de Bradford.

Reactivo Resultados

Tubos BSA g/ml Estándar BSA (0,5 mg/ml) l NaCl 0.15 M g Reactivo de Bradford ml A595 nm [proteína]

g

Blanco 0 0 200 2

1 2.5 10 190 2

1 2.5 10 190 2

2 5 20 180 2

2 5 20 180 2

3 7.5 30 170 2

3 7.5 30 170 2

4 10 40 160 2

4 10 40 160 2

Añadir 2 ml del reactivo de Bradford a los tubos estándar como se indica en la Tabla 1.

Dejar a temperatura ambiente y leer Absorbancia a 595 nm frente al blanco. El color es estable 1 hora.

- Graficar la curva estándar.

Muestra problema

Preparar diluciones de la muestra problema (1:10,1:20,1:50), utilizar NaCl.

Añadir 2 ml del reactivo de Bradford a los tubos que contienen la muestra problema como se indica en la Tabla 2.

Dejar a temperatura ambiente y leer Absorbancia a 595 nm frente al blanco. El color es estable 1 hora.

Tabla 2. Protocolo tipo para la cuantificación de proteínas por el método de Bradford.

Reactivos Resultados

Tubo

Dilución l Muestra problema Dilución l

NaCl 0.15 M g Reactivo de Bradford A595 nm [proteína]

g

Blanco 0 200 2

1 (1:10) 200 0 2

1 (1:10) 200 0 2

2 (1:20) 200 0 2

2 (1:20) 200 0 2

3 (1:50) 200 0 2

3 (1:50) 200 0 2

- Interpolar los datos de absorbancia en la curva estándar, para determinar la concentración de la proteína total en la muestra.

ANEXO 1: REACTIVOS

Reactivo de Bradford

Mezclar 10 mg de Comassie Blue G-250 con 10 ml de ácido fosfórico al 88% y 4,7 ml de etanol absoluto. Añadir H2O hasta 100 ml. Filtrar a través de papel de filtro y guardar en la oscuridad.

Soluciones estándar de proteínas

Seroalbúmina bovina (BSA) 0,5 mg/ml

Solución de NaCl 0.15 M

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