DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD (MICROENSAYO)
Enviado por brengarcial • 26 de Octubre de 2020 • Apuntes • 2.047 Palabras (9 Páginas) • 181 Visitas
1.- Materia: LABORATORIO DE METODOS DE ANÁLISIS.
2.- Practica: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD (MICROENSAYO).
3.-Alumno: GARCÍA LÓPEZ BRENDA.
4.-Grupo: 5QV1.
5.-Profesor: ARTURO RIVAS FARIAS.
6.- Fechas de realización: 12 y 14 de octubre de 2020.
7.- Fecha de entrega: miércoles 21 de octubre.
8.- Situación escolar: INSCRITO
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD (MICROENSAYO).
OBJETIVOS.
- Cuantificar la concentración de proteína en una muestra por medio del método de Bradford.
- Determinar el tipo de interferencia ocasionada por sustancias no proteínicas en la determinación por el método de Bradford.
- Medir la imprecisión e inexactitud del método de Bradford.
- Determinar si existe diferencias estadísticamente significativas entre el método de BCA (método estándar) y Bradford (método a prueba) en cuanto a precisión y exactitud.
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME:
Tabla 1. Curva de calibración de albúmina.[pic 1]
Concentración de albumina (μg/mL) | A595 |
4 | 0.141 |
4 | 0.135 |
8 | 0.232 |
8 | 0.219 |
12 | 0.301 |
12 | 0.303 |
16 | 0.36 |
16 | 0.355 |
20 | 0.438 |
20 | 0.426 |
Pendiente: 0.018 Ordenada: 0.075 Coeficiente de correlación: 0.9963[pic 2][pic 3]
Ecuación para el cálculo de la concentración: x=A595 – 0.075 / 0.018
Tabla 2. Replicas para el análisis estadístico.
Tubo | A595 | Concentración de albumina (μg/mL) |
1 | 0.318 | 13.5 |
2 | 0.334 | 14.3 |
3 | 0.322 | 13.7 |
4 | 0.327 | 14.0 |
5 | 0.314 | 13.2 |
6 | 0.327 | 14.0 |
7 | 0.303 | 12.6 |
8 | 0.309 | 13.0 |
9 | 0.308 | 12.9 |
10 | 0.309 | 13.0 |
Media | 13.4 | |
s | 0.56 | |
S2 | 0.31 | |
% CV | 4.10 | |
% Er | 11.66 | |
I.C de la media | L.I 12.9 L.S 13.8 |
Imprecisión: 4.10% (precisión = 95.9%) Inexactitud: 11.66% (exactitud = 88.34%)[pic 4]
[pic 5]
Diferencias de imprecisión entre el método de BCA y el método de Bradford.
Prueba F de Fisher.
Planteamiento de pruebas de hipótesis
Ho: S2Bradford = S2BCA
Ha: S2Bradford ≠ S2BCA
Condición para aceptar Ha: Fcal ≥ Ftablas
[pic 6]
Diferencia de inexactitud entre el método de BCA y el método de Bradford.
Prueba t-student.
Planteamiento de hipótesis.
Ho: XBradford = XBCA
Ha: XBradford ≠ XBCA
Condición para aceptar Ha: t cal ≥ t tablas.
[pic 7][pic 8]
Tabla 3. Comparación de ambos métodos.
Método | Media | S2 | n |
Bradford | 13.4 | 0.31 | 10 |
BCA | 12 | 0.84 | 10 |
Tubo | Sustancia | A595 | Concentración de albumina (μg/mL) | Tipo de interferencia generada. |
1 | Fenol al 0.2% | 0.343 | 14.8 | Positiva |
2 | Detergente comercial al 0.2% | 0.194 | 6.6 | Negativa |
3 | SDS al 0.2% | 0.178 | 5.7 | Negativa |
4 | Mercaptoetanol al 0.002% | 0.321 | 13.6 | Ninguna |
5 | EDTA 6 mM | 0.306 | 12.8 | Positiva |
Tabla 4. Efecto de sustancias no proteínicas en el método del BCA.
[pic 9]
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
Lo obtenido en la figura 1 nos arroja que la determinación por este método es fiable ya que el coeficiente de correlación es de 0.99, el trabajo del analista, las muestras y los equipos nos brindaron una buena cuantificación de la albumina presente en la muestra. La ley de Bouguer y Beer se cumple en un intervalo de concentración de albumina de 4 a 20 µg/mL.
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