Determinacion De Enzima En Glucosa

PRACTICA N 04 DETERMINACION ENZIMÁTICA DE GLUCOSA

4.1 Marco Teórico

La glucosa es oxidada enzimáticamente por la glucosa oxidasa GOD; D-glucosa oxigeno 1- oxidoreductasa;EC 1.1.3.4, a acido glucorónico y agua oxigenada: el H2O2 en presencia de peroxidasa -POD:Donador :Hidrógeno-peroxido oxidoreductasa ;EC 1.11.1.7.- produce la copulación oxidativa de la 4 amino fenazona 4-AF con un aceptor dando lugar a la formación de una quinonimina roja con absorbancia máxima a 505 nm.

4.2 Competencia

 Determina el contenido de glucosa a partir de una muestra utilizando métodos enzimáticos.

4.3 Materiales y Equipos

-Standard de glucosa 100 mg/ dl.

- Solución de glucosa oxidasa

-Tubos de prueba.

-Gradilla. -Puntas o tips de 10 a 100 ul

-Beacker -Pipeta automática de 10 a 50 ul --Suero humano -Pipetas de vidrio de 10 ml.

-Baño María. -Termómetro

-Espectrofotómetro. -Agua destilada

-Reloj o timer

4.4 Procedimientos

1. En una gradilla disponer tres tubos de prueba (Problema, Blanco y Standard ) y proceder como sigue:

REACTIVOS

PROBLEMA

STANDARD

BLANCO

Suero del paciente

10 ul - -

Standard

-

10 ul

Agua destilada

-

-

10 ul

Reactivo glucosa oxidasa

1 mL.

1 mL.

1 mL.

2. Colocar en un Baño María a 37° C durante 10 minutos.

3. Leer a 505 nm.

4. Obtención de la concentración de glucosa aplicando la siguiente fórmula:

mg/dL. de glucosa en muestra problema = Lectura del Problema X 100

Lectura del Standard

4.5 Resultados

Discuta los resultados obtenidos relacionándolos con su importancia en la vida humana.

4.6 Cuestionario:

1. Mencione las patologías relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos.

4.7 Fuentes de Información:

1. Devlin, T.M. Bioquímica: Libro de texto con aplicaciones Clínicas. Tomos I y II. Ed. Reverté Colombiana S.A.;2000

2. Lehninger, A. Principios de Bioquímica.Ed. Omega.Barcelona; 2001.

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