Estandarización De La Tinción De Wright

 Objetivo:

Determinar mediante la tinción de Wright las variaciones y anormalidades de estructura forma y tamaño de las células sanguíneas así como valorar el tiempo para una correcta coloración en un frotis sanguíneo para su identificación morfológica

 Introducción:

La tinción de Wright-Giemsa se utiliza comúnmente para teñir los elementos celulares de frotis de sangre periférica. Es útil en microbiología para demostrar la presencia de organismos intracelulares como Hitoplasma capsulatum y las especies de Leishmania. La tinción también es de utilidad para demostrar inclusiones intracelulares en frotis directos de piel o mucosas, como raspadon de cómea para tracoma.

El colorante de Wright también va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información obtenida de un frotis de sangre periférica depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloración.

Los colorantes de Romanowsky (Wright, Giemsa, May Grünwald) son mezclas de dos colorantes primarios, el azul de metileno y la eosina.

El azul de metileno (color azul), es un colorante básico, en las células se una a los componentes ácidos que se tiñen de color azul (basófilos) Para fines prácticos el único ácido que se encuentra en suficiente cantidad para ser identificado por medio de la tinción, es el ácido ribonucleico ribosomal. El ácido desoxirribonucleico, también abundante, tiene otras características tintoriales.

La eosina (color naranja) es un colorante ácido; en las células se une a la base que se observa de dicho color (eosinófilos) Dos ejemplos muy claros de sustancias básicas son la hemoglobina y la proteína básica de los eosinófilos, (esta última se encuentra en los gránulos maduros de dichas células) Mediante este tipo de colorantes pueden distinguirse los aspectos morfológicos de las células:

1. Forma, dimensiones y contorno de las células sanguíneas.

2. Núcleo celular y restos de cromatina.

3. Citoplasma de linfocitos.

4. Citoplasma de monocitos.

5. Granulaciones polinucleares:

a. Eosinófilos.

b. Basófilos.

c. Neutrófilos.

6. Hematíes.

7. Reticulocitos.

Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una buena diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloración rosada de los hematíes y la ausencia de precipitados.

 Material:

 Portaobjetos

 Pipetas Pasteur con bulbo

 Piseta

 Material biológico.

 Sangre capilar o venosa con anticoagulante

 Reactivos:

 Metanol

 Colorante de Wright

 Solución amortiguadora de fosfatos ph 7.2

 Equipo:

 Microscopio

 Contador de células

 Procedimiento:

o Tinción de Wright

1. Se realizan 4 frotis

2. Este se colocan sobre la varilla de tinción

3. Se les añade colorante de Wright (1.5ml)

4. Se les agrega 3.5mL de solución amortiguadora de manera que queden totalmente cubiertos y dejan reposar por 3,5,8 y 12 minutos

5. Después de transcurrido el tiempo lavar los frotis con agua de la llave

6. Secar al aire y se observan al microscopio una vez que estos estén secos utilizando aceite de inmersión

 Resultados:

Extendido de 3 minutos.

Se lograron observar las siluetas que forman los eritrocitos, pero no se lograron identificar otras células aparte de los eritrocitos. Por lo tanto se concluye

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