Separación de una mezcla de metileno y fluoresceína empleando cromatografía por adsorción
Enviado por Jair L. • 2 de Marzo de 2020 • Informe • 1.276 Palabras (6 Páginas) • 205 Visitas
Instituto Politécnico Nacional[pic 1][pic 2]
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de Métodos de Análisis II
Separación de una mezcla de metileno y fluoresceína empleando cromatografía por adsorción.
Marcela Esmeralda Cibrián Segura
Prof. Francisco Carmelo Fernández López
Sección 2
Grupo: 4IM1
Objetivos:
Separar dos colorantes mediante la cromatografía de adsorción y comprobar dicha separación con el perfil de elución.
Fundamento:
En la cromatografía por adsorción, que es un fenómeno físico en el cual una sustancia se une a la superficie de un sólido, la separación depende de los equilibrios de adsorción y desorción de los componentes de la mezcla entre la fase estacionaria, que son la alúmina y el silice, (este ultimo es el mas utilizado debido a su elevada capacidad de muestra) y la fase móvil. La fuerza con que es adsorbido un componente depende de la polaridad de este así como de la fase móvil, de la actividad del absorbente. La separación se basa en el diferente grado de adsorción de cada compuesto, sobre la superficie de una sustancia adsorbente en donde no existe ninguna interacción química, de modo que el compuesto se ve atraído a las zonas polares de la superficie del absorbente por fuerzas electrostáticas, quedando ligado reversiblemente a este. Para que el proceso ocurra es necesario, la presencia de un disolvente o mezcla de disolventes, que interaccionen con el absorbente y los componentes de la mezcla, es decir, debe existir una interacción triple entre el soluto, el disolvente y los compuestos de la mezcla con esto establece las proporciones relativas que se fijan y migran, a través del absorbente, los diferentes solutos, y por lo tanto determina la separación de los mismos.
Resultados:
Tabla 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno. | |||
Número de tubo | Volumen de elución (mL) | A493 Fluoresceína | A668 Azul de metileno |
1 | 3 | 0 | 0.003 |
2 | 6 | 0 | 0.967 |
3 | 9 | 0 | 1.582 |
4 | 12 | 0 | 0.135 |
5 | 15 | 0 | 0.024 |
6 | 18 | 0 | 0.019 |
7 | 21 | 0 | 0.025 |
8 | 24 | 0 | 0.026 |
9 | 27 | 0 | 0.02 |
10 | 30 | 0 | 0.039 |
11 | 33 | 0 | 0.018 |
12 | 36 | 0 | 0.013 |
13 | 39 | 0 | 0.011 |
14 | 42 | 0 | 0.006 |
15 | 45 | 0 | 0.01 |
16 | 48 | 0 | 0.011 |
17 | 51 | 0 | 0.011 |
18 | 54 | 0.177 | 0.005 |
19 | 57 | 2.006 | 0.011 |
20 | 60 | 1.14 | 0.004 |
21 | 63 | 0.185 | 0 |
22 | 66 | 0.083 | 0 |
23 | 69 | 0.055 | 0 |
24 | 72 | 0.048 | 0 |
25 | 75 | 0.03 | 0 |
26 | 78 | 0.022 | 0 |
27 | 81 | 0.02 | 0 |
28 | 84 | 0.015 | 0 |
29 | 87 | 0.017 | 0 |
30 | 90 | 0.004 | 0 |
[pic 3]
Preguntas extra:
- Especifique y defina los elementos del sistema cromatográfico para esta separación.
- Soporte: El soporte de esta cromatografía es una columna de vidrio, que está colocado verticalmente y contiene la fase estacionaria y a través del cual fluye la fase móvil, la gravedad es el factor de desplazamiento de los compuestos en esta cromatografía.
- Fase estacionaria: Como fase estacionaria se utilizó alúmina ácida (pH 5), este tipo de alúmina se conoce como alúmina de Brockman sin embargo este tipo de alúmina lleva un tratamiento especial con carbonatos y en vez de ser óxido de aluminio se vuelve un óxicarbonato de aluminio [Al2[OH]5]2+CO3*H2O. Que es un absorbente polar con carga positiva, de tal forma que retendrá con mayor fuerza a los componentes polares con carga negativa, es por eso que primero eluye el azul de metileno porque tiene carga positiva a diferencia de la fluoresceína que pH 5 tiene carga negativa y se absorbe a la alúmina.
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