Verificación Del Funcionamiento De Un Espectrofotómetro

Instituto Politécnico Nacional.

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas.

Ingeniería Bioquímica.

Cuarto Semestre.

Laboratorio de Métodos de Análisis.

Verificación del funcionamiento de un espectrofotómetro

Práctica de Laboratorio.

Objetivos

Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotómetro.

Verificar la exactitud de la escala de longitud de onda, la presencia de radiación dispersa, el ancho de banda, la exactitud fotométrica, la proporcionalidad de respuesta y el rendimiento global del instrumento.

Resultados

Los siguientes resultados se obtuvieron para las pruebas realizadas en el espectrofotómetro número 10.

Exactitud de la escala de longitud de onda.

Método del filtro de tierras raras (didimio) Espectro de transmisión

Longitud de onda (nm) %T Longitud de onda (nm) %T

400 19 500 50

410 32 510 59

420 46 520 52

430 56 530 36

440 54 540 26

450 46 550 32

460 45 560 54

470 48 570 69

480 45 580 53

490 43 590 25

A continuación se muestra el espectro de transmisión obtenido:

De color verde podemos ver los picos del espectro y con color rojo los valles que este presenta, si lo comparamos con el espectro teórico o del fabricante es particularmente similar ya que coincide en todos los puntos exceptuando el primer valle y primer pico con una variación en ambos de 10 nm por debajo del valor de fábrica.

Método de la solución estándar (NiSO46H2O al 20%)

Longitud de onda (nm) %T Longitud de onda (nm) %T

380 10 490 72

390 3 500 83

400 1.5 510 90

410 1 520 92

420 2 530 95

430 3 540 87

440 8 550 84

450 21 560 80

460 36 570 76

470 47 580 71

480 68 590 62

El valor máximo de porciento de transmitancia fue dé %T = 95 a una longitud de onda de 530 nm como se muestra en la tabla con color verde y en el espectro.

Las ventajas de los métodos que se emplearon son:

Los resultados fueron muy rápidos.

Los materiales como los filtros y el NiSO46H2O al 20%, fueron fáciles de emplear así como reutilizables, lo que hace los métodos baratos.

L a técnica es muy simple y sencilla, no se necesita un manejo especial del espectrofotómetro.

Las lecturas tomadas tienen estabilidad en la escala por lo que no hay tanto error al tomar lecturas.

Los espectros en ambos son muy similares a los del fabricante.

Las desventajas son:

El filtro de didimio aunque es reutilizable, es frágil y muy difícil de conseguir.

La concentración del NiSO46H2O al 20% se ve afectada con su uso ya que se va contaminando.

Se debe tener mucho cuidado que el filtro no esté rayado o las celdas con las que se mide no estén maltratadas.

Proporcionalidad fotométrica

Tabla de proporcionalidad entre A y λ para NiSO46H2O al 20%.

Empleando los valores de %T de la tabla anterior y con la formula:

A=2-log⁡(%T)

Ejemplo:

A_530=2-log⁡(95)=0.0222

Longitud de onda (nm) Absorbancia

530 0.0222

540 0.0604

550 0.0757

560 0.0969

570 0.1191

Calculando la ecuación tenemos que:

y = 0.0023x - 1.1918 con; b = -1.1918, m=0.0023 y su coeficiente de correlación es:

r² = 0.9775

Según la referencia este coeficiente es aun más bajo que el que se brinda (o.9809) aunque se especifica que se acepta variación. Y con base en este coeficiente podemos concluir que la relación entre la longitud de onda y la absorbencia en este intervalo es estrecha. Y que la relación existente entre ellos es que al aumentar la longitud de onda en el espectro, aumentara el valor de la absorbencia de manera proporcional.

Luz dispersa

Todo lo referente a resultados y conclusión de esta parte se encuentra en la Tabla de Resumen de resultados de evaluación del funcionamiento del espectrofotómetro.

Ancho de Banda

Todo lo referente a resultados y conclusión de esta parte se encuentra en la Tabla de Resumen de resultados de evaluación del funcionamiento del espectrofotómetro.

Si el ancho de banda disminuye provca una disminución en los mínimos de transmisión

Exactitud Fotométrica

Otros métodos para verificar la exactitud en el UV-VIS son:

Soluciones de dicromato de potasio en HClO4 0.001Ncon

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