Distribucion De Contadores

PRACTICA Nº 7

FRAGILIDAD OSMOTICA DE LOS ERITROCITOS

COMPETENCIA:

Determinar la fragilidad osmótica de los eritrocitos y demostrar el fenómeno de osmosis

GENERALIDADES.-

Existen varios metodos para medir la presion osmotica celular, en este caso se hara con los globulos rojos. la form biconcavo del eritrocito, implica un exceso de extension superficial con relacion a su volumen, lo que proporciona una gran cpacidad de deformabilidad. como la menbrana eritrocitaria es semipermeable en una solucion hipotonica el agua entra osmoticamente haciendo que aumente el volumen y adquiera l forma esferica. Con ello reduce su superficie respecto a su volumen, dando a la celula cierta rigidez que interfiere en el paso de la misma a traves de pequeñas aberturas, por lo que facilmente se rompe. Otro fenomeno adicional es la salida de hemoglobina, que es permitida por el estiramiento de la menbrana eritrocitaria. en esta practica se haran una serie de diluciones de nacl, de concentracion progresiva, en la que los eritracitos se someteran a diferentes concentraciones y se valorara la concentracion de nacl que produce la hemolisis en comparacion con una sangre normal. La prueba de fragilidad osmotica es una medida de la resistencia del eritrocito, a la hemolisis por estrés osmotico, la cual depende principalmente del volumen de la celula, del area de su superficie y de la funcion de la menbrana. los eritrocitos se incuban en solucion hipotonica de nacl, los eritrocitos absorben agua en un esfuerzo para conservar o para lograr el equilibrio osmotico y las celulas se hinchan hasta que se forma un esferocito. la captacion adicional del agua produce una menbrana porosa que permite la liberacion de hemoglobina (hemolisis). las celulas normales comienzan a hemolizar a concentraciones de nacl cercanas a 0.50% y la hemolisis es completa a una concentracion aproximada de 0.30% de NaCl. Debido a la desminucion en la proporción de superficie a volumen, los esferocitos son incapaces de expandirse tanto como las células se hemolicen. Los esferocitos también tienen un aumento en la permeabilidad de la membrana la cual contribuye al aumento de su fragilidad.

MATERIAL Y EQUIPOS

 centrifuga

 gradilla

 alcohol 70ºc

 algodón

 tubos de ensayo 13x100 ( 16 unidades )

 pipetas de 5ml y 1ml

 papel pareafiilm

 gotero y agua descartable

REACTIVOS

 solucion salina 1% tamponada al 7.4ph

MATERIAL BILOGICO

 sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

 se obtienen 5ml de sangre venosa y se mezclan perfectamente

 se colocan tubos de ensayo en una gradilla y se ennumeran de izquierda a derecha

 montar la prueba de la siguiente manera

Nº DE TUBO ML DE SOL. SALINA AL 1% TAMPONADA ML DE AGUA DESTILADA CONCENTRACION DE LA SOLUCION %

1 3.8 1.2 0.76

2 3.6 1.4 0.72

3 3.4 1.6 0.68

4 3.2 1.8 0.64

5 3.0 2.0 0.60

6 2.8 2.2 0.56

7 2.6 2.4 0.52

8 2.4 2.6 0.48

9 2.2 2.8 0.44

10 2.0 3.0 0.40

11 1.8 3.2 0.36

12 1.6 3.4 0.32

13 1.4 3.6 0.28

14 1.2 3.8 0.24

15 1.0 4.0 0.20

16 0.8 4.2 0.16

 MEZCLAR EL CONTENIDO DE LOS TUBOS

 AGREGAR A CADA TUBO 0.2ML DE SANGRE, INVERTIR CUIDADOSAMENTE CADA TUBO CON PAPEL PARAFIILM, PARA ASEGURAR LA MEZCLA

 LAS GRADILLAS QUE CONTIENEN LOS TUBOS SE DEJAN REPOSAR A TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE 30 MINUTOS

 TRANSCURRIDO EL TIEMPO INDICADO SE MEZCLA CUIDADOSAMENTE SU CONTENIDO Y SE CENTRIFUGAN LOS TUBOS A 2000 R.P.M DURANTE 5 MINUTOS

RESULTADOS

REALICE LOS ESQUEMAS CORRESPONDIENTES DEPUES DE CENTRIFUGAR:

 SE NOTA QUE A PARTIR DEL NUMERO 8 EMPIEZA EL ENROGESIMIENTO LO QUE SIGNIFICA QUE EMPIEZA LA HEMOLISIS

 EN EL TUBO 16 SE PUEDE VER QUE LA HEMOLISIS ES COMPLETA YA QUE NO QUEDA ERITROCITOS RESIDUALES EN EL FONDO DEL TUBO

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es fragilidad osmotica?

Es un examen para detectar si hay mayor probabilidad de que los glóbulos rojos se descompongan.

2. ¿Qué es osmoralidad?

Es la medida usada por los farmacéuticos, médicos y biólogos para expresar la concentración total de sustancias en disoluciones usadas en medicina

3. ¿Qué importancia clinica tiene la fragilidad osmotica?

Este examen se realiza para detectar la esferocitosis hereditaria y la talasemia. La esferocitosis hereditaria hace que los glóbulos rojos sean más frágiles de lo normal. Algunos glóbulos rojos en pacientes con talasemia son más frágiles de lo normal, pero un gran número de ellos es menos frágil de lo habitual.

PRACTICA Nº8

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL DE ORGANELOS CELULARES:

AISLAMIENTO Y PURIFICACION DE NUCLEOS

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