INSTRUCTIVO PARA LA METODOLOGÍA DE ANÁLISIS DE CUANTIFICACIÓN DE AMOXICILINA E IMPUREZAS POR HPLC

INSTRUCTIVO PARA LA METODOLOGÍA DE ANÁLISIS DE CUANTIFICACIÓN DE AMOXICILINA E IMPUREZAS POR HPLC

1. OBJETIVO

Definir la metodología para la cuantificación de Amoxicilina en materia prima, producto en proceso y producto terminado por cromatografía líquida HPLC, el análisis de impurezas orgánicas para la materia prima y la determinación de trazas de Amoxicilina.

2. DEFINICIONES

Am : Área de la muestra

Wstd : Peso del estándar

Pstd : Potencia del estándar

Astd : Área del estándar

Wm : Peso de la muestra

D : Factor de dilución

Pot Teó : Potencia teórica de la mezcla

Cet : Cantidad etiquetada

pP : Peso Promedio.

ru : Respuesta del pico de cada impureza de la Solución muestra.

rs : Respuesta del pico de Amoxicilina de la Solución estándar|

Cs : Concentración de ER Amoxicilina USP en la Solución estándar (µg/mL).

Cu : Concentración de Amoxicilina en la Solución muestra (mg/mL).

F : Factor de conversión de unidades (0,001 mg/µg).

3. DOCUMENTOS ASOCIADOS

PC - 016: Procedimiento para Determinar la Cantidad de Muestras a Preparar para Análisis por HPLC y Adecuabilidad del Sistema.

PA – 031 Plan para la Validación de Limpieza de los Equipos y Áreas de Producción.

4. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA TAREA

4.1. VALORACIÓN

CONDICIONES CROMATOGRÁFICAS

FASE MOVIL: : Buffer de KH2PO4 pH 5,0: Acetonotrilo (96:4)

LONGITUD DE ONDA : 230 nm

COLUMNA : C18 250 mm x 4,6 mm; 5 µm

FLUJO : 1,5 mL/min.

DILUYENTE : Buffer de KH2PO4 pH 5,0

TIEMPO DE RETENCION : 3,0 ± 0,5 min

TIEMPO DE CORRIDA : 6 minutos

VOLUMEN DE INYECCIÓN :10 µL

CONCENTRACION : 1,0 mg Amoxicilina /mL

TEMPERATURA : 30°C

Preparación del Buffer:

Pesar 13,6 g de fosfato monobásico de potasio transferirlos a un balón aforado de 2 L, disolver en agua purificada, completar a volumen con agua purificada. Homogenizar, ajustar a pH 5,0  0,05 con hidróxido de potasio 1 N.

Preparación de la Fase Móvil:

Medir 960 mL de Buffer pH 5,0 y 40 mL acetonitrilo HPLC para 1 L de fase móvil. Mezclar, desgasificar y filtrar por membrana de 0,45µm.

Preparación de la Solución Estándar:

Pesar con exactitud aproximadamente el equivalente a 25,0 mg del estándar de Amoxicilina y transferir a un balón aforado de 25 mL, con 17 mL de Buffer pH 5,0; agitar en el vórtex por 2 minutos a 2500 rpm y llevar al ultrasonido por 20 minutos o hasta disolución completa, dejar enfriar, agitar y completar a volumen con diluyente. Concentración final del estándar: 1,0 mg/mL.

Preparación de la Solución de Ensayo

- Materia Prima:

Pesar con exactitud aproximadamente 25,0 mg de la muestra a tratar de Amoxicilina y transferir a un balón aforado de 25 mL, con 17mL de Buffer pH 5,0; agitar en el vórtex por 2 minutos a 2500 rpm y llevar al ultrasonido por 20 minutos o hasta disolución completa, dejar enfriar, agitar y completar a volumen con diluyente.

Especificación: No menos de 900,0 µg y no más de 1050,0 µg de Amoxicilina por mg, calculados con respecto a la sustancia anhidra.

- Índice de mezcla del producto en proceso (cápsulas, tabletas, polvo para reconstituir)

Pesar el equivalente a 25 mg de Amoxicilina exactamente (teniendo en cuenta la potencia teórica del activo usado en Base Húmeda, si es necesario macere la muestra) y transferirlos a un balón aforado de 25 mL, disolver con 17 mL de Buffer de KH2PO4 de pH 5,0, agitar en vórtex por 2 minutos a 2500 rpm llevar a ultrasonido por 20 minutos o hasta completa disolución, agitar y completar a volumen con Buffer pH 5,0 HPLC y posteriormente filtrar la muestra, desechar los primeros 5 mL y colocar en un vial una porción de la muestra filtrada.

Producto Terminado

- Polvo para Reconstituir:

Reconstituya el producto con agua, conforme a las instrucciones de la etiqueta del producto y tome el equivalente a 50 mg de Amoxicilina ya sea por peso o volumen (tenga en cuenta el valor de densidad para los cálculos) en un balón aforado de 50 mL; adicionar 37 mL de Buffer de KH2PO4 de pH 5,0, agitar en vórtex por 2 minutos a 2500 rpm llevar a ultrasonido por 20 minutos o hasta completa disolución, agitar y completar a volumen con Buffer pH 5,0 HPLC y posteriormente filtrar la muestra, desechar los primeros 5mL y colocar en un vial una porción de la muestra filtrada.

- Tabletas:

Macerar mínimo 10 tabletas y pesar una cantidad equivalente a 50 mg de Amoxicilina exactamente (tenga en cuenta el peso promedio y la cantidad etiqueta para los cálculos), transferirlos a un balón aforado de 50 mL, adicionar 37 mL de Buffer de KH2PO4 de pH 5,0, agitar en vórtex por 2 minutos a 2500 rpm llevar a ultrasonido por 20 minutos o hasta completa disolución, agitar y completar a volumen con Buffer pH 5,0 HPLC y posteriormente filtrar la muestra, desechar los primeros 5 mL y colocar en un vial una porción de la muestra filtrada.

- Cápsulas:

Macerar el contenido de mínimo 10 cápsulas y pesar una cantidad equivalente a 50 mg de Amoxicilina (tenga en cuenta el peso promedio y la cantidad etiqueta para los cálculos), transferirlos a un balón aforado de 50 mL, adicionar 37 mL de Buffer de KH2PO4

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