Practica Actividad Enzimatica

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

Reconocer la Actividad de la Peroxidasa en diferentes tejidos.

Demostrar que la Concentración de Sustracto afecta la Cinética de las Reacciones Enzimáticas.

Determinar los Efectos del pH y la temperatura en la Velocidad de las Reacciones Enzimáticas.

INTRODUCCION:

La cinética enzimática tiene por objeto el estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, así como los factores que en ella influyen y los mecanismos por los cuales transcurren.

La velocidad de las reacciones enzimáticas se puede medir:

- por la cantidad de sustrato que desaparece en la unidad de tiempo

- por la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo

En esta práctica de laboratorio se comprobará la influencia de la concentración del sustrato (S), del enzima (E), el pH y la temperatura (T) en la cinética del enzima alfa-Amilasa salival en su acción sobre los enlaces alfa 1-4 del almidón. Para ello nos basaremos en la desaparición del almidón en la unidad de tiempo mediante el seguimiento de la reacción de color que produce el mismo, así como sus productos de hidrólisis con el Iodo en disolución de Ioduro de potasio (Reactivo de Lugol).

Dado que el almidón está integrado por dos fracciones, la amilosa y la amilo pectina, debe tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (así como sus respectivos productos de hidrólisis) con el reactivo de Lugol:

Practica Numero N 4

Actividad Nº 1: acción del las enzimas

En esta actividad se utilizo saliva teniendo como procedimiento el enjuagar la boca tomando un buche de 25ml de agua para la recolección de dicha saliva se dejo actuar por 1 minuto para luego depositarla en un vaso de precipitado de 100ml esta será la solución enzimática que se utilizara

Luego se procedió a la preparación de un tubo patrón añadiéndole 2ml de una solución de almidón al 2% agregándole una gota de lugol procediendo a agitar en el tubo de ensayo la solución, notándose que en el proceso de unión se obtuvo una línea gruesa se agito y tomo un color azul violeta

En el siguiente procedimiento utilizando un segundo tubo de ensayo limpio y seco se ligo 2ml de una solución de almidón y 2ml de saliva se agito dejándose reposar por tres minuto se le agrego 2 gotas de lugol observándose una coloración azul violeta al fondo y un poco clara arriba

Resultado:

Esta coloración azul violeta se debe a que el yodo se introduce en las espiras de las moléculas del almidón No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta

Actividad Nº2: Influencia de la temperatura en la actividad enzimática

Se preparo en tres tubos de ensayo tres ml de solución de saliva a c/u

Tubo A: se llevo con la solución de saliva a baño de maría por un minuto al apagarlo se le agrego 1ml de solución de almidón al 0,5% agitándose suavemente cuidando que la boca del tubo no apuntara hacia la cara y al transcurrir 1 minuto se le agrego una gota de lugol notándose que obtuvo una coloración azul violeta

Tubo B: se llevo el tubo de ensayo de solución de saliva a un vaso de precipitado con una capacidad de 250ml con hielo a una temperatura cercana de0 0C al alcázar la temperatura indicada

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