Envía Regalos A Estos Miembros

Tecnicas Histologias

Se denomina técnica histológica al conjunto de operaciones a que se somete una materia organizada (tejido biológico), a fin de que sea posible su estudio por medio del microscopio, posibilitando la observación de estructuras no visibles al ojo humano.1

Partes del Microscopio

Ocular: Es el conjunto de lentes que forma la imagen final ampliada que observamos.

- Revólver porta-objetivos: Los microscopios actuales suelen llevar varios objetivos que se disponen en una rueda llamada revólver. Para colocar el objetivo deseado hay que mover el revólver hasta la posición apropiada. Podemos encontrar microscopios dotados con revólver de 3, 4 o 5 posiciones.

- Objetivo: Es el dispositivo que contiene el conjunto de lentes que captan la luz proveniente de la muestra y generan la primera ampliación, los hay de diferentes aumentos.

- Platina porta-muestras: Es la superficie donde se coloca la muestra a observar.

- Sistema Köeller: Permiten centrar el haz de luz en el eje óptico del microscopio. (No todos los microscopios disponen de estos sistemas).

- Condensador: Permite concentrar el haz de luz en una zona pequeña de la muestra. (No visible en el esquema).

- Diafragma: Permite regular el contraste de la imagen.

- Control de intensidad de luz: Muchos microscopios actuales disponen de este dispositivo de control de la intensidad luminosa.

- Ruedas de desplazamiento: Son los mandos que permiten desplazar la muestra a lo largo y ancho de la platina porta-muestras (ejes X e Y).

- Control de enfoque micrométrico: Permite el foco fino mediante ligeros desplazamientos (en el eje Z) de la platina porta-muestras.

- Control de enfoque macrométrico: Permite la aproximación al plano focal mediante mayores desplazamientos de la platina porta-muestras a lo largo del eje Z (vertical).

- Estativo: Es la carcasa metálica que sirve de soporte a todo el resto del sistema. El estativo se acopla a la base formando un bloque sólido y estable.

Fijación

En este paso el tejido obtenido se coloca en una sustancia fijadora para evitar los cambios post-mortem. Unos de los fijadores más usado es el formol al 10% (formaldehido). En el caso de que utilicemos más adelante el microscopio electrónico, usaremos glutaraldehído (para proteínas) u osmio (para lípidos).

Lavados: Se debe lavar el tejido para quitar el exceso de fijador.

Deshidratación

Suena incoherente que se deba lavar el tejido y después deshidratarlo. El exceso de fijador al momento de la infiltración, incluso en la microtomía, podría afectar los cortes histológicos, y por ello se debe lavar. La deshidratación se hace empleando diferentes soluciones de alcohol de concentración creciente.

Aclaramiento

En este paso se sustituye el alcohol por un disolvente de parafina. El más usado es el xilol (xileno) ya que como la muestra está deshidratada, el xilol entrará hasta lo más profundo del tejido. También el tejido pierde color y adquiere un tono acaramelado.

Infiltración

En este paso la muestra se coloca en parafina líquida, cabe mencionar que se debe usar parafina histológica. Como se ha dicho en el paso anterior el tejido está completamente lleno de xilol, ahora debido a ósmosis sale el xilol y entra la parafina.

La deshidratación, aclaramiento e infiltración pueden ser realizadas manualmente pero hoy en día se realizan de modo automático en máquinas específicas.

Inclusión

Aquí se forman bloques de parafina dentro de los cuales están las muestras a estudiar. También hay maquinas especializadas para la inclusión en parafina de tejidos. Después de su inclusión y posterior secado, estos se deben poner a enfriar en un congelador para su posterior corte.

Microtomía

Se realizan cortes histológicos muy delgados según lo requerido o la costumbre del laboratorio donde se realice la técnica. Los cortes van desde 0,5 micras hasta 8 u 10 micras. Los cortes se echan al baño de flotación y se ´pescan´ con un portaobjetos, se marcan con la fecha, el tipo de tejido y la tinción con que se van a procesar. El ángulo de corte entre el cuchillo del microtomo y el bloque ha de estar entre 10º y 15º. Una vez realizado el corte se da un baño de agua destilada, para que la parafina se estire. Un buen corte histológico debe tener un grosor aproximado de 3-5 micras para que sea fácilmente atravesado por la luz.

Tinción

Hay muchos tipos de tinciones para diferenciar en los tejidos las diferentes estructuras o sustancias.

La tinción más usada o también llamada "de rutina" es la de hematoxilina y eosina (H&E). Se usa un colorante llamado hematoxilina que tiñe las sustacias ácidas o que las contengan, como el núcleo que contiene ácido desoxirribonúcleico (ADN) La eosina amarillenta tiñe las estructuras básicas como el citoplasma y demás orgánulos eosinofílicos de la célula.

Observación

Como se mencionó al principio algunos autores no consideran la observación como un paso de la técnica histológica sino el objetivo final de la misma. Como se puede deducir, se observa la laminilla al microscopio y se busca lo que se necesite ver para llegar a un diagnóstico.

La técnica histológica es muy empleada en laboratorios y hospitales. Permite hacer diagnósticos de distintas enfermedades, como para saber si un tumor es maligno

...