Bioquimica

Materiales:

• 1 gradilla.
• 10 tubos.
• 2 micropipetas (200 y 100 ul).
• 3 vasos precipitados.
• Baño de hielo (0ºC).
• Baño termorregulador (90ºC).
•  Estufa  a 37ºC.
• Cubetas para espectrofotometría.
• Espectrofotómetro.

Soluciones y  reactivos:

• Solución de almidón al 2%.
• Lugol.
• Solución salina fisiológica (0.9%).
• Agua destilada.
• Saliva humana.

Metodología:

Para comenzar se juntó en el vaso precipitado aproximadamente 5 ml de saliva.

Se procedió a enumerar 5 tubos de ensayo.

Fueron agregadas las concentraciones de almidón, más 500 ul de lugol y 5 ml de agua destilada.

Para así obtener la absorbancia y poder realizar la curva de calibración gracias a la siguiente tabla:

Dándonos la siguiente curva de calibración:

[pic 1]

Experimento 1: determinación de la actividad enzimática.

1. Se enumeró 2 tubos de ensayo, a los cuales posteriormente se les agregó 3 ml de solución neutra de almidón 2%(p/v).
2. Se tomaron los tubos para colocarlo en baño térmico a 37°C aproximadamente unos 2 minutos.
3. Posteriormente a un tubo se le añadió 1ml de saliva diluida y al segundo tubo se le agrego suero fisiológico.
4. Los tubos listos se incubaron a 37C por 10 min.
5. Luego de esperar los 10 min se procedió a agregar a los tubos lugol 500ul
6. Finalmente nos dirigimos a tomar en el espectrofotómetro las absorbancia de cada tubo, para poder averiguar la concentración de almidón en cada tubo.

Experimento 2:

1. Se comenzó enumerando 4 tubos de ensayo, a los cuales le añadimos 1ml de solución saliva diluida.
2. Para cada tubo había una concentración de temperatura que se había que regir:

• Tubo 1 a 0 grados.
• Tubo 2 se dejó a temperatura.
• Tubo 3 se dejó a 37grados.
• Tubo4 se dejó en 90grados

A estos tubos se les agrego 3ml de solución de almidón 2 % y finalmente se incubaron a las temperaturas correspondientes. Añadimos lugol (500ul), realizamos la absorbancia por el espectrofotómetro y finalmente pudimos determinar la concentración de almidón encada uno de los tubos.

Curva:

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