CELULAS LE O CEULAS DE LUPUS

CELULAS LE O CELULAS DE LUPUS

materiales;

tubos de macro-hematocrito portas

frasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de hepaerina jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de largo embudo

Introducción;

El Lupus Eritematoso Sistemico es una enfermedad autoinmune, que afecta a muchos tejidos y organos como articulaciones, piel, sistema nervioso, riñon, corazon, pulmón, sangre, higado, bazo y ojos.

Las células LE son polimorfonucleares que fagocitaron restos nucleares alterado, proveniente de la destrucción del núcleo de otros leucocitos, por el llamado Factor LE (factor nuclear). Este es Ig G- anti ADN que se fija a la superficie del núcleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por anticuerpos, es fagocitado por los neutrofilos.

El objetivo es hallar neutrofilos que tengan adherido an su superficie restos nucleares, o bien que los restos esten en su interior.

Existen 2 métodos (entre otros)

A) Método sin coágulo:

1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas que posean 1 gota de heparina.

2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar vigorosamente por 5 a 10 minutos para generar la lisis de leucocitos.

3- Llevar la muestra a estufa de 37 eC entre 1 a 4 horas, para darle tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de los lisados y que decanten los globulos del plasma.

4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en la interface plasma-globulos rojos y descargar dentro de 2 a 4 tubos de macrohematocrito.

5- Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por 5 minutos.

6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitosde los tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido con extensor.

7.-Colorear por el método de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersion.

B) Método con coágulo:

1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular durante2 horas a 37 ºC

.2- Centrifufar a 3500 rpm por 10 minutos

.3- Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas degasa, y éstas sobre un embudo

.4- Aplastar el coagulo con una varilla y recojer el producto en untubo de ensayo.

5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematocrito con la jeringa con aguja larga, y centrifugar 15minutos a 2000 rpm

.6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luegotomar la capa de leucocitos y depositar en portas para hacerextendidos

.7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver conobjetivo de inmersion.

Observacion e interpretacion:

Buscar los campos bien coloreados y con las celulas bienseparadas, evitando lo observacion de celulas "pegoteadas" por efectode la lisis y la extension.La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que fagocitaronrestos nucleares de los lisados, o bien los tenga adheridos en susuperficie, que se notara por la diferencia de color entre el restonuclear y el nucleo de leucocito entero, y se informara "Se observancelulas LE"El "Fenomeno de Roseta" se debe a la adhesion de 2 o masneutrofilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debediferenciar de las celulas "pegoteadas" propias de extendido.La presencia de leucocitos vacuolados no indica necesariamentela presencia de celulas LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular.La prueba no es totalmente especifica, debido a queenfermedades autoinmunes tambien generan celulas LE, y no tienegran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus.Esto se explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos,que inhibe la formacion de este fenomeno, por lo actualmente no tienevalor diagostico y es necesario realizar otras pruebas, tal como La busqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y especificas.

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