Histologia PRESERVACIÓN

La histología veterinaria es la ciencia que se enfoca sobre la morfología detallada de los animales domésticos y correlaciona estructuras específicas con la función. Como un componente de biología estructural, histología veterinaria, que es sinónimo de microanatomía veterinaria, implica el examen y la descripción de anatomía microscópica de las células normales del cuerpo y todos sus contenidos y productos. A medida que se reconocen los tipos de células, una apreciación de su agrupación y organización se puede hacer-el identificación de tejidos La orientación y composición de los diferentes tejidos, a su vez, proporcionan la base construir para los órganos y sistemas de órganos del cuerpo. Y es importante entender claramente lo funcional relación de cada estructura corporal, ya sea sea ​​célula, tejido u órgano, de forma inclusiva. A ese final este libro de texto incorpora información útil de las otras ciencias que revelan directamente la función, incluyendo fisiología, bioquímica, biología celular, y ocasionalmente, patología

PRESERVACIÓN

 Las células y los tejidos deben examinarse estructuralmente, en un manera tradicional (por microscopía de luz y / o electrón microscopía) necesitan ser preservados. De otra manera, las células pueden someterse a autolisis (autodigestión) y ser invadido por organismos oportunistas como rápidamente multiplicando bacterias Adecuada preservación o fijación debe cesar la putrefacción y la autolisis que acompañar a los cambios post mortem y mantener el tejido en un estado lo más cercano posible a las condiciones de vida. La mayoría de las fijaciones se realizan químicamente usando una variedad de agentes que rinden materiales dentro de las células a estados relativamente insolubles y, en efecto, les permiten permanecer insoluble durante los tratamientos posteriores como la deshidratación y la incrustación. De esta manera, una un fijador útil que minimiza la distorsión y la contracción. El fijador correcto también permite una buena tinción y permite al observador reconocer el necesario elementos que distinguen células y tejidos de uno otro. La fijación generalmente se realiza al exponer tejidos a conservantes químicos como el formaldehído. Mecánicamente hablando, la exposición puede ser activa o pasivo. El proceso activo de fijación implica reemplazar fluidos corporales con un perfundido como el lavado con solución salina, que es seguido por el fijador de elección, 10% formalina tamponada, por ejemplo. Este proceso, que es llamada fijación de perfusión, implica la introducción de perfundidos, solución salina y luego el fijador, en uno o más arterias principales mediante el uso de una bomba de presión o simplemente por gravedad La fijación de perfusión puede requerir grandes volúmenes de perfundidos, dependiendo del tamaño del animal o región del cuerpo a preservar. Tiene la ventaja de preservar una gran masa a fondo y relativamente uniformemente En general, la fijación de perfusión es la método preferido para muestrear la mayoría de los tejidos animales. En comparación, la fijación pasiva implica colocar el tejido en el conservante, de nuevo como la formalina, y se basa en la difusión gradual del fijador a
reemplace los fluidos naturales. Este proceso, que se llama la fijación por inmersión está restringida por la capacidad del fijador penetrar en el espécimen y en consecuencia es la mayoría efectivo para cantidades comparativamente pequeñas de tejidos (2 cm o menos de espesor). La fijación de inmersión, que es también llamada fijación pasiva, requiere un volumen de fijador que debe exceder el de la muestra por al al menos 5: 1 y la reposición de fijador fresco varias horas después de la inmersión inicial. Infiltración pasiva es un proceso más largo que el proceso de perfusión y puede requerir varios días a 1 mes o más para convertirse eficaz. Una vez conservadas, las muestras pueden almacenarse en la habitación temperatura o refrigeración indefinidamente siempre que cantidad adecuada de fijador (al menos cuatro veces el volumen de la muestra) está presente. Sin embargo, si las muestras se mantienen demasiado tiempo en relativamente fuerte o "dura" conservantes, que son osmóticamente bastante altos, los tejidos pueden volverse duros y marchitos. Como resultado, la incrustación es difícil y la tinción se debilita mucho (Tabla 1-1). Los fijadores fuertes o fuertes pueden ser útiles para acortando los tiempos de preservación y manteniendo efectivamente ciertos materiales biológicos que no son necesariamente mantenido por otros fijadores menos severos o menos hipertónicos. Las muestras conservadas en fijadores fuertes deben ser procesado expeditivamente. Hay momentos en que la preservación de los tejidos es realizado de una manera "suave", que incluye fijadores que son ligeramente hipertónicos para la muestra. Preservación de este tipo se utiliza para un examen minucioso de células con gran aumento. Por lo general, un fijador como glutaraldehído (un dialdehído vs. formaldehído, un monaldehído) preserva las células de una manera que permite que las estructuras subcelulares retengan una apariencia que está más cerca del estado de vida que el preservado por un monaldehído.

PROCESAMIENTO Y EMBEDDING Los tejidos que se han conservado o pretratado pueden ser procesado para el seccionamiento de varias maneras. Ciertos tejidos, como especímenes cerebrales, por ejemplo, se puede seccionar directamente usando temperaturas frías (hielo seco o criostato) para mantener la firmeza. La mayoría beneficiarse del uso de una matriz de soporte, es decir, una medio de inclusión. Parafina, que consiste en un verdadero cera no sintética, es la incrustación más común medio para crear secciones histológicas stand.ard. Eso puede tener una consistencia dura o blanda, dependiendo de la temperatura utilizada para la inserción (50 ° -55 ° C para soft medios de comunicación; 56 ° -68 ° C para medios duros). Cuando las secciones más delgadas (Espesor de 5-6 μm o menos) son deseables, que es generalmente el caso, se prefiere la parafina dura. Como la parafina no es miscible con agua, los tejidos debe estar completamente deshidratado antes de incrustarlo de una manera graduada utilizando alcohol (etanol) o alguna otra sustancia miscible en agua que eliminará el agua. La mayoría de los alcoholes no se disolverán ni mezclarán con parafina. En consecuencia, 'se necesita un paso intermedio que resulta en colocar las muestras en un fluido que es miscible con parafina y alcohol antes de la infiltración de la matriz de inclusión es posible. Esta paso intermedio se conoce generalmente como "limpieza" porque los tejidos deshidratados a menudo se vuelven claros o más transparente que anteriormente. Tejidos que se examinarán con ampliaciones muy grandes mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM) deshidratación similar, pero tiene que estar incrustado en un matriz de soporte que resistirá los rigores de un fuerte vacío (10-5 torr) y un electrón intenso haz que se genera a partir de una fuente de alimentación de 75,000 voltios o más. Los plásticos se usan rutinariamente para estas razones. Incrustación de plástico también se puede utilizar para la luz observaciones microscópicas de pequeñas muestras de tejidos (~ sualmente menos de 1 cm de ancho) y se compara con muestras embebidas en parafina del mismo tejido. Contracción y artefactos de expansión de las muestras y sus secciones se reducen en gran medida en plástico integrado preparativos. Desafortunadamente, la incrustación de plástico tiene varias limitaciones importantes, incluida la dificultad de infiltración los tejidos, la interferencia con el tradicional manchas histológicas y costos. Es en gran medida para estos razones por las que la inclusión de parafina es más común utilizado para la histología y la histopatología de plástico incrustación.

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