Acidos Nucleicos

INTRODUCCIÓN

Los ácidos nucleicos son sustancias que como su nombre lo indica, fueron aisladas en el núcleo celular, pero sean encontrados ácidos nucleicos en citoplasma así como en mitocondrias y en cloroplastos.

El Aislamiento del ADN es el principio de muchos métodos de: Ingeniería genética Medicina forense Bioinformática Nanotecnología de ADN Historia y antropología Transformación Secuenciación Mapeo físico Mutagénesis, donde se intenta realizar un proceso que retrase la separación. Una mezcla uniforme de las sustancias con similares fases.

La lisis celular es la rotura de la membrana celular MÉTODOS FÍSICOS MÉTODOS QUÍMICOS Tratamiento con alcalis • Tratamiento con lisozima + EDTA • Empleo de detergentes Sonicación • Choque osmótico • Congelación/descongelación • Homogeneización con abrasivos • Cizalla liquida • Cizalla solida

La proteólisis es la degradación de proteínas ya sea mediante enzimas específicas, llamadas proteasas, o por medio de digestión intramolecular , que catalizan la ruptura de sólo una o de pocas uniones peptídicas.

Se utilizan enzimas proteolíticas como la pronasa, la cual es activa contra un amplio espectro de proteínas naturales.

La pronasa se debe auto digerir a 37C por lo menos una hora antes de utilizarla Una vez concluida la digestión con proteasa, se realiza una digestión de Rnasa para eliminar la presencia de RNA.

Se eliminan las proteínas de la muestra utilizando solventes orgánicos como el fenol. El fenol utilizado en la extracción de las proteínas debe ser bidestilado o ultra puro, y se utiliza a una relación 1:1 volumen por volumen con la muestra que se pretende limpiar.

Generalmente se recomienda realizar 1 extracción con fenol seguida de 1 extracción de fenol: cloroformo (1:1), y por lo ultimo una ultima extracción con cloroformo para limpiar toda traza de fenol.

Para poder concentrar el ADN después de la eliminación de las proteínas, se utiliza una serie de sales entre las que se encuentra el acetato de sodio, acetato de potasio acetato de amonio y cloruro de litio entre las mas usadas ,.Una vez que el ADN ha estado en contacto con los cationes seleccionados se precipita con 2 volúmenes de etanol absoluto o 1 volumen de isopropanol bajo las siguientes condiciones :mayor a 2 h a 20 centígrados de 15 a 30 min a menos 70 centígrados, o 10 o 15 min en hielo seco con etanol. Se re suspende en un Tapon que puede ser de tris-EDTA El EDTA ayuda al agotamiento de iones que se utiliza comúnmente para inactivar enzimas dependientes de metal que podrían dañar el ADN o las proteínas

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