Acidos nucleicos-Resultados

RESULTADOS

1. Aislamiento de ADN

Para el aislamiento de ADN usamos una muestra de bacteria de E. Coli de la cual estrajimos su ADN  plasmídico mediante el método de lilis alcalina en donde mediante una serie de pasos que incluye una centrifugación constante la adición de GTE, SDS alcalino, fenol y cloroformo, logramos aislar el ADN plasmidico de la bacteria la cual se podía observar en el fondo del tubo empendorf en forma de una pastilla que apenas se alcanzaba a ver y que fue resuspendida en 20 uL de agua destilada y se congeló.

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1. Análisis y cuantificación de Ácidos Nucleoicos

En esta parte realizamos el análisis y cuantificación de la muestra obtenida anteriormente, para el análisis realizamos una electroforesis en gel de agarosa. El gel se hico con 30ml de una sol. Al 1% de agarosa y se usó el Bromuro de etino como marcador, finalmente se empleó glicerol para otorgarle densidad y corrimos 10uL de los 20uL de la muestra, obteniendo la siguiente placa.

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En el gel podemos observar que en fondo de todos los casos (exceptuando el 4, la nuestra, debido a que se corrió poca muestra) se puede observar todo el RNA degradado que había, las bandas de la parte superior corresponden a un solo tipo de plásmido, la razón por lo que hallan corrido diferente es que a pesar de ser el mismo, estos tienen estructura diferente (desenrollada, enrollada, muy enrollada) por lo que al momento de ser corridas hacen que unas puedan atravesar los poros del gel más fácilmente.

Nuestra muestra fue el carril 5 (tomando en cuenta el carril del control) en ella prácticamente no se observa RNA degradado, y se puede notar la presencia de tres bandas que apenas se distinguen, esto debido a que se corrió poca muestra, lo que concluimos es que al menos había tres formas del mismo plásmido en nuestra muestra.

Para la cuantificación empleamos la muestra restante (en este caso menos de 10ul, ya que por alguna razón no se completó) y se leyó su absorbancia en un espectrofotómetro a 260nm y 280nm con los siguientes resultados:

Para obtener la cantidad de ADN se usa la siguiente fórmula 50xA260

50X0.343=17.5ug/ml

Haciendo los ajustes de las diluciones:

(17.5ug/ml(100))/1000 = 1.75 ug/ml de DNA obtenidos lo que en relación a otros equipos es bajo.

La relación A1/A2 nos indica en cierta manera la pureza del ADN obtenido en el caso de ADN durante mas cercano a 2 sea, más puro es, como se puede observar nuestro valor es de 1.678 lo cual se aproxima, pero indica que la muestra obtenida no es del todo pura.

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