DETECCIÓN DE Salmonella

INVESTIGACIÓN DE PATÓGENOS

PRÁCTICA 1. DETECCIÓN DE Salmonella sp. ANÁLISIS DE

MAYONESA (ISO 6579)

Material y medios de cultivo

- Muestra de mayonesa

- Balanza

- Cuchara metálica

- Alcohol

- Pipetas de 10 ml

- Asas de platino

- Frasco estéril de 50 ml

- 25 ml de agua de peptona tamponada

- Tubos con 10ml de caldo Rappaport Vassiliadis

- Placas con agar XLD o SS

- Reactivo MUCAP

- Lámpara de luz UV

- Estufa a 43°C

- Estufa a 37°C

Agua de peptona tamponada

Componente Concentración (g/l)

Peptona de caseína 10

Cloruro sódico (NaCl) 5

Hidrógeno fosfato disódico

dodecahidratado (Na2HPO4.12H20) 9

Dihidrógeno fosfato potásico (KH2PO4) 1,5

pH 7,0

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15min.

Caldo Rappaport Vassiliadis

Componente Concentración (g/l)

Peptona de caseína 4

Peptona de soja 1

Cloruro magnésico hexahidratado (MgCl.6 H20) 29

Cloruro sódico (NaCl) 8

Hidrógeno fosfato dipotásico (K2HPO4) 0,4

Dihidrógeno fosfato potásico(KH2PO4) 0,6

Verde malaquita 0,036

pH 5,5

Esterilizar en autoclave a 115°C durante 15min.

2

Agar SS

Componente Concentración (g/l)

Peptona 10

Lactosa 10

Sales biliares 8,5

Citrato sódico 10

Tiosulfato sódico 8,5

Citrato férrico 1

Verde brillante 0,0003

Rojo neutro 0,025

Agar 12

pH 7

Esterilizar en autoclave a 115°C durante 15min.

Métodos

Día 1: Pre-enriquecimiento

Realizar un homogeneizado en agua de peptona tamponada. Pesar 2,5g

asépticamente en un recipiente estéril y añadir 25ml de agua de peptona

tamponada. Incubar a 37°C durante 24h.

Día 2: Enriquecimiento selectivo

Transferir 1ml del homogeneizado a tubos con 10ml de caldo Rappaport-

Vassiliadis (RP). Incubar a 43°C durante 24h.

Día 3: Aislamiento

Sembrar por estrías en placas de agar SS a partir de los tubos con

crecimiento en la fase de enriquecimiento. Incubar a 37°C durante 24h.

Día 4: Confirmación

Las colonias típicas crecidas en agar XLD (rojas con o sin centro negro)

se confirman empleando el reactivo MUCAP (sustrato de la caprilato esterasa).

Añadir una gota del reactivo sobre una colonia típica y observar bajo luz

ultravioleta, las colonias que presentan fluorescencia serán confirmadas como

Salmonella.

3

INVESTIGACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES

PRÁCTICA 2. RECUENTO DE MICROORGANISMOS MESÓFILOS

TOTALES (ISO 4833)

Material y medios de cultivo

- Muestra de carne picada

- Balanza

- Cuchara metálica

- Alcohol

- Pipetas de 10 ml

- Asas de platino

- Stomacher

- Bolsas estériles de Stomacher

- Tubos con 9 ml de solución salina

- Batería de diluciones en solución salina (10-1, 10-2 y 10-3)

- Tubos con 15 ml de medio de cultivo plate count agar (PCA) en sobrefusión

- Batería para tinción

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