Determinación de la actividad enzimática de la α – amilasa.

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DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

ENZIMOLOGÍA

INFORME N°2

Integrantes: Abigaíl Benavides, Bryan Ibáñez, Denyss Guilcazo, Yasmin Rodríguez.

Fecha:   20 de mayo del 2016

NRC: 2435[pic 3]

1. TEMA:  Determinación de la actividad enzimática de la α – amilasa.

1. SISTEMA DE OBJETIVOS

2.1. Objetivo General

Determinar la actividad enzimática de la α – amilasa.

1. Objetivos Específicos

• Calcular los parámetros cinéticos (Vmáx y Km) de las reacciones catalizadas por la α – amilasa.
• Realizar una curva de calibración para la concentración de almidón y encontrar su ecuación de ajuste.
• Relacionar la actividad de la α – amilasa y la concentración de almidón.

1. MARCO TEORICO

Entre las enzimas que actúan sobre los componentes de la dieta y participan en el proceso digestivo que tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal se encuentra la α-amilasa salival. Esta enzima se encarga de la degradación del almidón, que constituye la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana, y glucógeno, hasta una mezcla de hidratos de carbono más sencillos. Dependiendo del nivel de actividad y el tiempo de actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre y un resto, que no puede degradar, llamado dextrina límite (Garrido, 2010). Esta enzima perteneciente al grupo de las hidrolasas, actúa por hidrólisis simple, es decir, utiliza agua para romper al azar los enlaces α (1-• 4) que unen residuos de glucosa en el almidón, a excepción de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas (Devlin, 2004).

Las amilasas son enzimas dependientes de cloruro, que pierden su función en ausencia de iones de cloruro y tiene actividad enzimática a un pH de 7. Dado que la actividad enzimática de la α-amilasa puede darse en cualquier punto de la cadena, es más rápida que la β-amilasa. En los animales es una enzima digestiva mayor y su pH óptimo está entre 6.7 y 7.2. Se entiende a la actividad enzimática como acción catalítica que considera una doble función: fijación específica del substrato y su transformación química (Battaner, 2013).

Figura 1.Reacción en la que interviene  la enzima α-amilasa

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Tomado de: (Voet & Voet, 2006)

1. RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Tabla 1. Absorbancias del almidón a diferentes concentraciones.

Elaborado por Yasmin Rodríguez

Figura 2.Curva de calibración para el almidón a la  longitud de onda de 540nm, la pendiente de la curva es m=1,1453=ε (coeficiente de extinción molar).

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              Elaborado por Yasmin Rodríguez

• Según la ley de Beer-Lambert:

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Dónde:

A= absorbancia

C=concentración

ε=coeficiente de extinción molar

l=longitud de la celda= 1cm

Se despeja la concentración (C) del sustrato transformado o producto obtenido, usando las absorbancias medidas de la Tabla 2.

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            Tabla 2. Absorbancias en los tres tiempos de incubación de las diferentes concentraciones de almidón.

Elaborado por Abigail Benavides

Tabla 3. Concentración del sustrato transformado o producto obtenido  (p/v) en los tres tiempos.

Elaborado por Abigail Benavides

Tabla 4. Actividad enzimática de α-amilasa a diferentes tiempos y concentraciones de sustrato de sustrato (S1, S2, S3, S4, S5).

Elaborado por Yasmin Rodríguez

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