Determinación de proteinas por Kjeldahl

Reporte práctica # 2. [pic 1]

Universidad de

Guadalajara [pic 2]

CUCS

4° Semestre

Bloque # 3  

Prof. Arturo Alfaro.

Bromatología

Integrantes:

Ibarra López Danna Guadalupe

González González Lizbeth Anaid

Gravina Navarro María Andrea Serratos Villaseñor Margarita [pic 3]

Introducción:

● Determinacion de proteinas por Kjeldahl.

 Objetivo :

Determinar la concentración de nitrógeno presente en la muestra para luego ser transformado a través de un factor en proteína.  

 Alcance y campo de aplicacion:

 El método es aplicable a alimentos en general.  

Fundamento:

El método se basa en la destrucción de la materia orgánica con ácido sulfúrico concentrado, formándose sulfato de amonio que en exceso de hidróxido de sodio libera amoníaco, el que se destila recibiendolo en: Ácido sulfúrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de ácido es valorado con hidróxido de sodio en presencia de rojo de metilo, o  Ácido bórico formándose borato de amonio el que se valora con ácido clorhídrico.  

● Técnica Sorensen-Walker.

Fundamento

Está técnica determina el contenido en proteínas de la leche mediante una valoración ácido-base, ya que tras la adición de formol a la muestra, el formaldehido se une a los grupos amino de los aminoácidos de las proteínas dejando los grupos carboxilos libres. Este hecho produce cambios en la acidez titulable de la leche siendo valorada con hidróxido sódico. La cantidad de hidróxido sódico utilizado en la neutralización es utilizado para calcular la cantidad de proteínas presente en la muestra.

Material

1. Bureta graduada en 0.1 mL.
2. Matraz erlenmeyer de 100 mL.
3. Pipetas de 10 mL y 5 mL.

Reactivos

1. Solución de hidróxido sódico (0.1N). 2. Solución comercial de formol (40%).

3. Indicador: solución de fenolftaleína al 1 %.

Procedimiento

1. Tomar 10 mL de leche problema en un matraz erlenmeyer.
2. Añadir 20 mL de agua destilada y adicionar unas gotas de fenoltaleína.
3. Neutralizar la ácidez titulable natural de la leche con la solución de hidróxido sódico hasta la aparición de un color rosa.
4. Añadir posteriormente a la leche neutralizada 2 o 3 mL de formol para dejar libres los grupos carboxilos de los aminoácidos. Tras la adición del formol la muestra se vuelve a acidificar y se muestra nuevamente de color blanco.
5. Añadir unas gotas de fenoltaleína y valorar la acidez con hidóxido sódico, hasta la aparición nuevamente del color rosa.

Cálculo

La cantidad de hidróxido sódico 0.1N gastados en la segunda valoración se multiplican por 2.24, y el resultado se expresa como porcentaje de proteínas. El contenido de caseína en la leche lo podemos calcular a partir de una regla de tres, teniendo en cuenta que la cantidad de caseína en la leche de vaca es aproximadamente del 78.5 %. 

Fundamento:

 En el procedimiento usual para determinar la concentración total de ácidos, una alícuota de la solución que contiene el ácido se titula con una solución estándar de álcali hasta el punto en el cual una cantidad equivalente de la base ha sido añadida. Este punto final puede detectarse mediante indicadores (cambio de color), electrométricamente (pHmetro), etc.

Acidez Titulable

 Fundamento:

 El método se basa en determinar el volumen de NaOH estándar necesario para neutralizar el ácido contenido en la alícuota que se titula, determinando el punto final por medio del cambio de color que se produce por la presencia del indicador ácido-base empleado.  

 Reactivos: 

1. Hidróxido de sodio (NaOH) 0,1 N.
2. Fenolftaleína al 1% en alcohol al 95%.  

Procedimiento: 

1. Pipetear 10 ml de jugo de fruta o vino (5 ml en caso de jugo de limón o 1 ml de vinagre) a un erlenmeyer que contenga 100- 200 ml de agua hirviendo (500 ml o más si la muestra es coloreada)
2. Continuar calentando por 30-60 segundos.  
3. Dejar enfriar un poco y titular con NaOH 0,1 N usando 0,5 ml) o más si la cantidad de agua es mayor) de fenolftaleína al 0,5% hasta coloración rosada. 4. Repetir el proceso para una segunda determinación

● Rose-Gottlieb

Fundamento del método

Se añade alcohol a la leche para precipitar la caseína. Se extrae la grasa con éter dietílico. Es preferible a los métodos en los que se utilizan ácidos o calor, y para cuando el material contiene mucha azúcar.

Resultados:

Práctica de Khendal:

Peso inicial: 17

HCL: .1124 N

Peso final: 30.9  

Resultados: 

Acidez titulable y Caseína por Sorensen Walker 

Vol. Inicial – 22

Vol. Final – 25.4

Diferencia : 3.4

0.098 equivalentes – 1000 ml  

[pic 4]

              ?               -    3.4 ml  

Siguiente titulación:

Vol. Inicial – 25.4

Vol. Final – 28.6  

Diferencia: 3.2

Formula:         (3.2) (0.098)

(1.46) (100)         [pic 5]

                 9  [pic 6]

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● Preguntas de prevaloración:

1. ¿Cual es el factor de conversión del nitrógeno?

            6.25

1. ¿Que es tashiro?

            Es un indicador que sirve para la determinacion de nitrogeno

1. ¿Cual es el ácido utilizado para preparar tashiro?

            Rojo metilo y azul metilo

1. 3 etapas para la determinación de proteína por micro kjeldahl.

             Digestión-Destilación-Titulación 5. ¿Que determina la técnica sorensen?

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