Diagrama de flujo de la práctica Fermentación de la glucosa por la levadura de panificación

Diagrama de flujo de la práctica Fermentación de la glucosa por la levadura de panificación

A. Fermentación alcohólica de Saccharomyces cerevisiae

• Hervir unos minutos la solución de glucosa al 5% en un amortiguador de acetatos antes de usarse para reducir el contenido de oxígeno disuelto.
• Pesar un gramo de levadura y disolverla en 10 mL de la solución de glucosa al 5% en amortiguador de acetatos. La suspensión se prepara agitando con una varilla de vidrio hasta que sea homogénea, es conveniente efectuar el procedimiento de mezclado con relativa rapidez procurando que no entre aire en la suspensión.
• Agregar 1 mL de 2,6 diclorofenol-indofenol.
• Tomar 3 mL de la suspensión anterior con una jeringa con aguja.
• Clavar la jeringa en la parafina para evitar la entrada de oxígeno.
• Anotar el volumen inicial del contenido de la jeringa y el color de la suspensión.
• Anotar el volumen del contenido de la jeringa y el color de la suspensión cada 10 minutos durante una hora de incubación. Es importante usar jeringas cuyos émbolos cierren herméticamente y sean de fácil desplazamiento, ya que, de lo contrario, las lecturas de gas producido pueden resultar alteradas. La producción de gas no es inmediata, ya que la levadura consume el poco oxígeno disponible, primero, mediante la oxidación aerobia de la glucosa.
• Anotar el color de la suspensión, puesto que este indica el ambiente redox en el interior en la jeringa. La solución incolora es una solución reducida y si hay presencia de color del indicador significa una oxidación. El color azul indica un ambiente alcalino y el rosa uno ácido.
• Desechar todos los tubos que contengan 2,6 diclorofenol-indofenol en el contenedor que se asignó para ello, ubicado en el área de Residuos químicos peligrosos.

B. Determinación de etanol en un control positivo

La presencia de etanol en la muestra se puede comprobar mediante su oxidación. El etanol se convierte en acetaldehído con ácido sulfocrómico.

• Colocar 1 mL de la solución de etanol 10 mM en un tubo limpio. Etiquetarlo como control positivo.
• Adicionar 0.5 mL de solución sulfocrómica al control positivo.
• Calentar 5 minutos en baño de agua hirviendo.
• La prueba de presencia de etanol es positiva cuando aparece un color verde en la muestra e incluso se percibe el olor característico del acetaldehído.
• Observar, describir y registrar los resultados.
• Desechar todos los tubos que contengan solución sulfocrómica en el contenedor que se asignó para ello, ubicado en el área de Residuos químicos peligrosos.

C. Determinación de etanol en la suspensión de levadura

• Tomar los 3 mL de la suspensión de levadura de la jeringa en un tubo para centrífuga. Se toma después de la hora de incubación.
• Centrifugar a 3,500 rpm durante 5 minutos.
• Tomar 1 x del sobrenadante para la determinación de etanol.
• Repetir los pasos 2 al 5 del apartado anterior.

...