Ejemplo de la Reacción en cadena de polimerasa (tipos)

Método

Fundamento

Aplicaciones

Ventajas

Desventajas

PCR

Reacción en cadena de polimeraza. Es una reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente.

-Huella digital genética.

-Test de paternidad.

-Detección de enfermedades hereditarias.

-Comparación de la expresión génica.

-Clonamiento de genes.

-Mutagénesis.

-Análisis de DNA antiguo.

-Genotipificación de polimorfismos

Podemos obtener una secuencia de ADN amplificada.

Solo se obtiene un resultado final, de la reacción realizada

Q-PCR

Se basa en el mismo principio que la técnica de PCR, teniendo como objetivo detectar y cuantificar las secuencias especificas de ácidos nucleídos mediante el uso de marcadores fluorescentes en la reacción. La acumulación del producto de amplificación se mide a medida que la reacción avanza, en tiempo real, con la cuantificación del producto después de cada ciclo.

-Determinación y cuantificación rápida y sensible de ácido nucleído en diversas muestras biológicas

-Cuantificar con precisión los cambios en la expresión génica.

-Medición cuantitativa del número de copias de genes

-Presencia de genes mutantes

El resultado es dado desde el momento en que se está realizando la reacción y mide los ciclos que realiza la reacción.

Es más costosa, debido a los flourocromos añadidos.

RT-PCR

El mismo fundamento que PCR, pero se utiliza como sustrato al ADN complementario (ADNc) proveniente del ARNm se le conoce como RT-PCR (Reverse Transcription-PCR, por sus siglas en inglés).

Esta conversión se logra mediante una reacción conocida como transcripción reversa y controlada por la enzima transcriptasa reversa, capaz de convertir el ARNm en una molécula de ADNc.

-Rápida y precisa valoración de cambios en la expresión de genes como resultado de la fisiología, fisiopatología o la evolución.

-Sistemas modelo para medir la respuesta a estímulos de tipo experimental y para adentrarse en los cambios potenciales a nivel proteico y funcional.

-Medir cargas virales o bacterianas, o en evaluación del estado de enfermedades como el cáncer

Puede extender una cadena de ADN aún más pequeña.

Se necesita de la enzima transcriptasa reversa

Q-RT-PCR

Reacción en cadena de polimerasa en tiempo real y con la enzima transcriptasa reversa, es decir, junta las dos variantes de PCR (RT-PCR y Q-PCR) para formar otra variante mas eficaz.

-Cuantificación de genes.

-Cuantificación viral.

Las secuencias de DNA ampliadas con más largas, gracias a la transcriptasa reversa y estas son medidas en cada ciclo, para representar la extensión de ADN que se esta realizando.

Es una reacción más costosa que el PCR convencional o que alguna de las anteriores variantes.