Enredadera de las Células (Citoesqueleto e Inmunohistoquímica)

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Enredadera de las Células

(Citoesqueleto e Inmunohistoquímica)

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

 Medicina Veterinaria y Zootecnia  

 Cartel Científico

                                                     Introducción: [pic 3][pic 4]

El interior de la célula eucariota posee una organización interna estructural y funcional establecida por una serie de filamentos proteicos que forman un entramado resistente y dinámico que se extiende a través del citoplasma, sobre todo entre el núcleo y la cara interna de la membrana celular, aunque también en el interior del núcleo. A este conjunto de filamentos se le denomina citoesqueleto. Entre sus funciones están que las células se puedan mover, establecer la forma celular y poder cambiarla, establecer la polaridad de algunas células, la disposición adecuada de los orgánulos, la comunicación entre ellos, los procesos de endocitosis y exocitosis, la división celular (tanto meiosis como mitosis), lugar de anclaje de moléculas y orgánulos, resistir presiones mecánicas y reaccionar frente a deformaciones, entre otras muchas más.

Objetivos: 

• Detectar antígenos presentes en las células y tejidos utilizando anticuerpos marcados con una enzima
• Conocer los fundamentos y aplicaciones de la inmunohistoquímica indirecta

Desarrollo:

1.  Se  hace  la  siembra  de  células  en  cubreobjetos  y  se  permite  su  propagación. [pic 5]

2.  Se  elimina  el  medio  y  se  fijan  con  paraformaldehído  al  4%  en  PBS  o  formalina acuosa  al  10%  en  PBS,  se  incuban  por  20  minutos  y  se  lavan  con  PBS.

3.  Se permeabilizan  las  células  con  tritón  X100  0.5%  en  PBS  por  5  minutos  y  se  lavan con  PBS.   [pic 6]

 4.  Se  bloquean  con  albúmina  sérica  bovina  1%  en  PBS  por  20  min  y  se  lavan  con PBS.  4.  Se  bloquean  con  albúmina  sérica  bovina  1%  en  PBS  por  20  min  y  se  lavan  con PBS.[pic 7]

5.  Se  adicionan  30  -  50  l  del  primer  anticuerpo  (ratón  anti-vimentina)  en  cada cubreobjetos  y  se  dejan incubar  por  toda  la  noche  a  4°C  en  cámara húmeda. Se lavan con  PBS.

6.  Se  ponen  30  -  50  l  del  anticuerpo  secundario  conjugado  con  HRP  (conejo  antiratón)  por  cubreobjetos  y se  dejan  incubar  por  60  min  en  cámara  húmeda.  Se  lavan con  PBS. [pic 8]

 7.  Se  hace  el  revelado  con  el  4-cloro-1-naftol  manteniendo  los  cubres  en  una  caja  de Petri.

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