Métodos de separación, cuantificación, identificación y purificación.

Métodos de separación, cuantificación, identificación y purificación.

 Biología Celular

• Espectrofotometría: Técnica que estudia y mide la interacción de moléculas con la radiación electromagnética. Se hacen incidir sobre una sustancia a estudiar radiaciones electromagnéticas de diferente energía (suele estudiarse un rango de radiación que van aumentando o disminuyendo), mediante este rango de longitud de onda se obtiene un espectro de absorción de la sustancia y a partir de aquí se puede identificar con bastante exactitud de qué sustancia se trata.

Esto se fundamenta en la ley de Lambert- Beer que establece que hay una relación lineal entre la absorción de la luz a través de una sustancia y la concentración de ésta.

• Cromatografía: método de separación, purificación e identificación, se basa en las diferencias de migración de los componentes de una mezcla sobre una fase estacionaria por influencia de una fase móvil. La fase Estacionaria puede ser un sólido, un liquido o solido-liquido; y la fase móvil liquida o gaseosa. La selección de fases se hace en base a que los componentes tengas distintos coeficientes de distribución. Existen distintos tipo de cromatografía: de papel, capa fina, columna, líquidos y gases. Se utiliza el Rf (relación de frentes o factor de retención) ya que para cada sustancia es distinto lo que permite su identificación.
• Centrifugación: Método por el que se separan sólidos de líquidos de diferentes densidades por medio de una fuerza giratoria. Se basa en el peso, forma, tamaño y densidad de los componentes de la muestra. La parte sedimentada es donde se encuentran las partículas más densas. Consta de: Un marcador de tiempo, tacómetro (la velocidad a la que gira el rotor), freno (regula la velocidad), control de velocidad, tapa, cámara, interruptor. Existen diferentes tipos de centrifugación; la diferencial es recomendada para organelos, la isopicnica que se usa para la separación de DNA, la zonal y la ultra centrifugación la cual usa mayor rpm (revoluciones por minuto) y cuenta con control de temperatura.
• Diálisis: Método para separar moléculas grandes de moléculas pequeñas; consiste en el paso de moléculas de bajo peso molecular a través de una membrana dializadora (semipermeable) cuyos poros son ultramicroscópicos. El disolvente y moléculas de bajo peso molecular como iones inorgánicos y pequeñas moléculas orgánicas atraviesan la membrana desde la solución más concentrada a la más diluida. Este método se basa en el tamaño, peso, forma e índice de difusión de una molécula. La difusión es el fenómeno por el cual las moléculas disueltas tienden a distribuirse uniformemente en el seno del líquido, siendo inversamente proporcional a su peso molecular. Se emplea normalmente para la separación de la sal a una solución de proteínas.
• Electroforesis: Método para la separación y purificación de mezclas de compuestos biológicos. Es el fenómeno por el que una molécula con carga neta se desplaza en un campo eléctrico. La moléculas biológicas que contienen grupos ionizables y pueden existir en disolución en forma de especies con carga eléctrica; son aminoácidos, péptidos, proteínas y ácidos nucleicos. Estas diferencias constituyen la base suficiente para una migración diferencial. Se usa en una gran mayoría en la materia del ADN combinante ya que permite saber que carga poseen los polipéptidos.

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