MICROBIOLOGIA proceso de despirogenización

A Comparative Study of Different Methods for Endotoxin Destruction

Como sabemos el proceso de despirogenización se define como la eliminación de todas las sustancias pirogénicas incluyendo las endotoxinas bacterianas, y se logra generalmente por separación o inactivación. La inactivación se pueden obtener mediante la desintoxicación de la molécula de LPS usando Los tratamientos químicos que rompen los puentes lábiles o bloquean los sitios necesarios para actividad pirogénica como: hidrólisis ácida, oxidación con peróxido de hidrógeno, hipoclorito de sodio, óxido de etileno etc, sin embargo todos estos métodos son  costosos, y dependen del tiempo, el pH y la concentración, tanto del reactivo como de los pirógenos. Y por separación se encuentran Las membranas de ultrafiltración que  se basan en un límite de exclusión por peso molecular, donde las endotoxinas son retenidas en la superficie de la membrana, también tenemos las membranas de ósmosis inversa, donde la eliminación de endotoxina se da por exclusión de tamaño, al ser los poros de la membrana  lo suficientemente pequeños para impedir el paso de pirógenos, como se observa estos métodos se basan en las características físicas de los pirógenos; tamaño, peso molecular, carga o afinidad electrostática. (NEUZA, 2008)

Existe otro método de inactivación de pirógenos utilizado en materiales termorresistentes mediante la aplicación de calor seco en hornos y túneles de convección, conducción o radiación; se fundamenta en la destrucción térmica de las endotoxinas por incineración. Este método y dos variaciones encontradas del mismo fueron el objetivo de este artículo, donde se evaluó el éxito de la despirogenización en cada uno. (Sandle, 2006)

Se evaluaron dos métodos alternativos: el calor húmedo (autoclave) y enjuague con NaOH y los resultados en comparación con despirogenación por calor seco. La Reducción de endotoxina se evaluó a través de indicadores de endotoxina, que se prepararon utilizando una preparación de control estándar de endotoxina (CSE) derivada de Escherichia coli. (Sandle, 2006)

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Condiciones del ensayo

Calor seco: viales se trataron en un horno Carbolite a 250 ° C durante 30 minutos.

Calor húmedo: los viales se trataron en autoclave a 121 ° C durante 30 minutos.

NaOH: cada vial se enjuago con 10 ml de NaOH 0,1 N durante 1 minuto.

Tabla de resultados

[pic 2]

• De acuerdo a la tabla de resultados se puede concluir que el calor seco fue el más eficaz para la despirogenación, al observarse una reducción de las endotoxinas realmente significativa. (Sandle, 2006)
• Los métodos de calor húmedo, y  tratamiento con NaOH no presentan diferencias significativas entre la media de reducción de endotoxinas entre ellos, pero si al compararlas con el método de calor seco. (Sandle, 2006)
• El método de calor húmedo es ineficaz frente a despirogenización ya que la cinética de inactivación de las endotoxinas por calor seco, demostró que a 180 ºC o por debajo de esto la despirogenizacion es incompleta incluso después de largos periodos. (Sandle, 2006)
• La endotoxina puede ser inactivada por calor húmedo, pero en presencia de peróxido de hidrogeno  ya que garantiza la despirodenización debido  a la oxidación de los ácidos grasos en la parte de lípido A del lipopolisacárido.  (Anonimo, 2011)
• La reducción de endotoxinas en el método de enjuague con NaOH se da por la hidrólisis de los enlaces éster y amida que se encuentran en la parte de lípido A de la endotoxina; este se puede potencializar al agregarle calor; dando una mayor reducción.  (Cortez, 2006)
• Con el empleo de calor seco es posible llevar a cabo procesos de despirogenización confiables y consistentes, resultan suficientes para reducir la concentración de endotoxinas, por lo que es posible obtener un proceso exitoso. (Fernñndez, 2001)

Referencias Bibliográficas

Anonimo. (2011). ivtnetwork. Recuperado el 4 de Junio de 2016, de ivtnetwork: http://www.ivtnetwork.com/sites/default/files/Depyrogenation.pdf

Cortez, m. (2006). validación de la pruebas de esterilidad por la tecnica de filtración de membrana y endtoxinas bacterianas por el metodo LAL . Bogotá: Pontificia universidad javeriana .

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