Microbiología y Laboratorio “Práctica No.2. Preparación y Esterilización de materiales y medios de cultivo”

Universidad Autónoma de Nuevo León

Facultad de Ciencias Químicas
Ingeniería Química.

Unidad de Aprendizaje:

Microbiología y Laboratorio

“Práctica No.2. Preparación y Esterilización de materiales y medios de cultivo”

San Nicolás De los Garza, Nuevo León a 10 de Octubre del 2017.

Objetivo

Conocer los principios de la preparación y esterilización de diversos materiales y medios de cultivo de uso común en microbiología; así como el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la contaminación microbiana en el laboratorio.

Introducción

La esterilización es la eliminación completa de cualquier forma de vida y existen varios métodos para llevarla a cabo. La elección del método depende de la naturaleza física del material al que se va esterilizar y del uso que se le piensa dar.

A continuación se describirán algunos de los métodos más utilizados para esterilizar.

Por calor seco: este deshidrata las células y oxida sus proteínas. Es recomendable exponer el material por lo menos una hora 30 minutos a una temperatura de 180 a 220°C, regulándose con un termómetro, este método se recomienda para cuando se aplica la esterilización en material de vidrio.

Por vapor: El vapor esteriliza por coagulación de las proteínas. El vapor a presión es un agente esterilizante debido a que se alcanzan temperaturas superiores a las alcanzadas por ebullición. El aparato de laboratorio diseñado para esterilizar por éste método se llama autoclave. Consiste en una doble cámara que puede saturarse de vapor y mantenerse a una determinada presión y temperatura durante un tiempo largo.

Radiación: La luz solar tiene un poderoso efecto germicida. Esta propiedad se debe a los rayos muy cortos de alta frecuencia llamados ultravioleta, que matan a las bacterias cuando su intensidad es fuerte.

Calor al rojo: Se utiliza para las asas de platino empleadas en la siembra o inoculación, para las bocas de los tubos de cultivo y frascos, portaobjetos y cubreobjetos. Se esteriliza suspendiéndolos en la flama del mechero.

Ebullición: El agua en ebullición mata a las formas vegetativas por coagulación de las proteínas, pero no mata a las esporas. Este método raramente se usa en el trabajo de laboratorio.

En el caso de esta práctica usaremos el método por vapor y por rojo vivo, para el autoclave se operara a una presión de 15 lb/in2 (121 °C) dejándolo así por 15 minutos de manera estable y dejando bajar estas condiciones hasta que la presión se iguale con la atmosférica.

Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo con su composición química y a su aplicación en: enriquecidos, selectivos y diferenciales, principalmente. O bien, si se considera su consistencia se clasifican en: sólidos, semisólidos y líquidos. En la preparación de medios de cultivo existen algunos compuestos de uso muy común como son las peptonas, el extracto de carne, extracto de levadura y el agar. Estos compuestos contienen nutrientes para la célula y hacen posible el desarrollo de una gran cantidad de microorganismos. El caldo nutritivo y el agar nutritivo son ejemplos de medios de cultivo líquido y sólido, respectivamente, y son utilizados para el crecimiento de microorganismos heterótrofos.

Resultados

Después del procedimiento para la preparación del material y medios de cultivo, la esterilización de los mismos, el vertido de los medios en cajas petri para su posterior solidificación y la prueba de esterilidad de materiales en zona aséptica y no aséptica se comprobó la información acerca de la formación de colonias microbianas en la superficie de cada uno de los medios de cultivo. La información se refleja en la siguiente tabla.

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