Operaciones Básicas de Laboratorio Cromatografía

Universidad Central del Ecuador

Facultad de Ciencias Químicas

Operaciones Básicas de Laboratorio

Cromatografía

Nombre: Dominga Granda Rueda                                                Carrera: química

1. Clasificación general de los métodos cromatográficos

(Skoog, West, Holler, & Crouch, 2005)

1. Reveladores (métodos y reactivos de comprobación)

Los métodos y reactivos de comprobación se utilizan cuando los analitos en un cromatograma no presentan colores característicos a simple vista. Entre los métodos más utilizados se encuentran:

• Fluorescencia: se puede observar las sustancias de un cromatograma con ayuda de luz UV cuando se agrega una sustancia luminosa en el adsorbente. Algunos indicadores fluorescentes son los derivados del pierno, como el 3-hidroxipireno-sodio, la rodamina, o la 2,7-diclorofluoresceína.  Los analitos aparecen sobre un fondo fluorescente, y según su estructura química se pueden observar como zonas absorbentes  o fluorescentes.

• Reactivos de comprobación: se utilizan cuando los analitos de la muestra no presentan color propio ni absorción de UV. Al utilizar estos reactivos el analito forma derivados coloreados.

1. Ácidos fuertes: como ácido sulfúrico, ácido nítrico; éstos permiten calcinar la materia orgánica por calentamiento de la placa a temperaturas elevadas después de la asperción del reactivo.

1. Vapor o aspersión de yodo: el cromatograma se pone en contacto con vapores de yodo, éste tiñe a los analitos dando lugar a manchas marrones; la cromatoplaca debe ser expuesta al aire durante 5 minutos para eliminar la el exceso de yodo. Cuando estas manchas son asperjadas con una solución de almidón, dan lugar a manchas de color azul.

1. Solución de permanganato de potasio/ácido sulfúrico: es una gente oxidante de compuestos orgánicos fuerte, después de realizar la cromatografía se evaporar los eluyentes. Se asperja la cromatoplaca con la solución, e inmediatamente se puede observar manchas blancas sobre un fondo rosa.

(Radenrath, 1969)

Práctica  N° 1

Separación e identificación de una mezcla de aminas aromáticas incoloras a través del uso de placas fluorescentes y vapores de yodo.

Objetivos:

• Separar una mezcla de aminas aromáticas incoloras utilizando cromatografía en capa fina.
• Identificar el orden de los componentes de la mezcla problema en la cromatoplaca y sus respectivos factores de retención con ayuda de placas fluorescentes y vapores de yodo.

Materiales y Reactivos:

Procedimiento Experimental:

1. Aplicar una pequeña cantidad de la mezcla problema la cromatoplaca. Colocar tres puntos de siembra, el primero con una aplicación de la muestra, el segundo con dos aplicaciones de la muestra, y el tercero con cuatro aplicaciones de la muestra. Dejar secar bien cada punto de siembra entre aplicación y aplicación.

1. Después de secar los punto de siembra colocar la cromatoplaca dentro de la cámara de desarrollo. Elegir la proporción de los disolventes en el eluyente. Esperar a que el eluyente haya alcanzado el frente de la placa. Retirar la cromatoplaca y dejar secar.

1. Observar la cromatoplaca bajo la lámpara de luz UV, se observará  el fondo de la placa brillando de color verde, y se podrá observar zonas oscuras, aquellas son las zonas en donde se encuentra el analito. Marcar las zonas con ayuda de un lápiz.

1. Introducir la cromatoplaca dentro de un frasco con pequeñas granallas de yodo, esperar durante 10 minutos. Los vapores de yodo se unirán a la cromatoplaca y se podrá observar manchas pardas sobre la placa. Si la aplicación de yodo es excesiva y no se puede observar las manchas, dejar la placa al aire durante un par de minutos, así el yodo en exceso sublimará y será liberado de la placa

Consideraciones Experimentales:

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