Resumen de actividades realizadas durante pasantía en laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular

Resumen de actividades realizadas durante pasantía en laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular.

                                                                                   Curso: Biología Celular

Objetivos de la pasantía

         La actividad de la pasantía fue realizada con el fin de familiarizarse con el ambiente de trabajo dentro del Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular. Para aprender  así diversas técnicas comúnmente aplicadas en este laboratorio y a la vez conocer distintos tipos de instrumentos  presentes en este lo que en conjunto permite incentivar el desarrollo temprano del razonamiento y el método científico.

Actividades Realizadas

*Acá solo se muestran algunas actividades de las realizadas durante la pasantía, lamentablemente no se pueden mostrar datos experimentales debido al extravío de mi cuaderno en el laboratorio.

1.Conductividad de muestras salinas:

En primer lugar en esta actividad se hicieron soluciones con distinta concentración de sales, en esta oportunidad se ocupo una balanza electrónica para medir las distintas cantidades de soluto que iban a estar presente en las distintas soluciones.

En segundo lugar se midió la la conductividad que poseía cada solución con un instrumento de laboratorio llamado conductímetro el cual entregaba valores en siemens por metro ( s/m).

En general se demostró que la soluciones que poseían una mayor concentración salina son las que poseían valores mas altos de conductividad

2.Curva de Calibración de Bradford

Materiales:

-Espectrofotómetro

-Cubetas para espectrofotómetro

-Reactivos

-Muestra proteica

-Micro pipetas

-Agua destilada

Método:

En general se van a haber distintas soluciones en las cubetas, pero todas con un volumen similar^[a].

-Cubeta con el blanco: esta no posee proteína, solo el reactivo y agua destilada. Este tubo va a determinar la absorbancia que posee el reactivo y sirve como referencia para determinar la absorbancia del resto de los tubos.

-Cubetas con concentraciones ya conocidas: acá se utiliza una solución que posee una concentración proteica conocida, para realizar la curva se van a necesitar distintas disoluciones de la “solución madre” , para esto se toma como referencia la siguiente formula:

V1 * C1 = V2 * C2

      Hay que tener en cuenta que todas las cubetas tenían la misma cantidad de reactivo y para que todas tengan el mismo volumen total,   lo que le falte a cada una  será completado con agua destilada.

-Cubeta con la muestra incógnita: Posee las  mismas condiciones que las anteriores, osea, la misma cantidad de reactivo y la muestra de la proteína en cuestión, el volumen faltante será completado con agua destilada.

- La primera cubeta incorporada al espectrofotómetro será la muestra blanco, ya que con este se calibrara en cero y se podrá determinar la absorbancia de las muestras en cuestión.

-Luego se incorporaron las cubetas con las concentraciones ya conocidas y se anotaron los niveles de absorbancia, en ultimo lugar se incorporo la cubeta con la muestra problema t se anoto su nivel de absorbancia.

Conclusión:  En general este método permite obtener una curva  denominada de referencia ya que se realiza con cantidades conocidas de  una sustancia, que son utilizadas para determinar la cantidad de sustancia, en este caso proteínas,  que posee una muestra incógnita.^[b]

5.Geles de poliacrilamida^[c]

 En primer lugar en esta actividad se me mostro como hacer geles de poliacrilamida a partir de un protocolo ya existente.

• Se creaban dos soluciones distintas que eran puestas sobre un molde que tenia un “peine”
• Se esperaba por un momento hasta que el gel tomara consistencia para así retirar el peine, el que tenia como objetivo dejar unos casilleros para poder incorporar las muestras.

*El gel tenia un sistema electroforético discontinuo, debido a que estaba formado por geles de distinta porosidad  y ph, en donde el sector superior o compactador, que es donde están los casilleros, era el que permitía de alguna forma alinear las muestras. En segundo lugar estaba el gel separador que era el que estaba en la zona inferior.

-    Luego con una micropipeta se rellenaron los casilleros del gel con muestras    problemas.

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