Materiales y Métodos. Objetivos

Materiales y Métodos

Para esta práctica de laboratorio se requirió en primera instancia una muestra de sangre que se extrajo por venopunción, luego de esto, en un tubo de ensayo se agregaron 2 ml de sangre y 2 ml de sales balanceadas mezclando suavemente para luego agregar a 3 ml de Ficoll con cuidado y sin mezclar. Después de realizar lo anterior, se centrifugó la muestra a 400 g por 30 minutos a 18-20 °C, y se extrajo la capa superior del resultado con una pipeta Pasteur, sin alterar la capa media correspondiente a linfocitos, para luego transferir cuidadosamente dicha capa de linfocitos a un nuevo tubo de ensayo, donde se agregó tres volúmenes de solución de sales balanceadas, mezclando y centrifugando a 100 g por 10 min a la misma temperatura; se descartó el sobrenadante, se adicionaron 6 ml de solución de sales balanceadas, se mezcló y se sometió nuevamente a la misma centrifugación, descartando por ultima vez el sobrenadante. El resultado de todo lo anterior se resuspendió en 1 ml de PBS, tomando 10 microlitros con una micropipeta y extendiéndolo en el espacio libre del cubre y porta de la cámara de Neubauer para proceder a observar y realizar el conteo mediante el microscopio.

Objetivos

• Realizar satisfactoriamente una preparación y separación de células mononucleadas de la sangre.
• Observar y cuantificar mediante el microscopio los posibles linfocitos aislados de la muestra.
• Familiarizarse con los elementos utilizados en el laboratorio así como ganar destreza y experiencia en cuanto al uso de los instrumentos.

Conclusión

De la practica de laboratorio correspondiente se logró llevar a cabo el aislamiento de células mononucleadas (linfocitos) de la muestra de sangre utilizada, adquiriendo conocimientos y destreza en la realización de los procedimientos completados. Por otro lado se pudo observar bajo el microscopio el resultado de la separación, de modo que pudieron cuantificarse los linfocitos presentes. Para finalizar se destaca la importancia de la practica y su uso en el ámbito médico tanto clínico como de investigación para el estudio de las células mononucleadas.

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