EVALUACION DE LA ACTIVIDAD CITOTOXICA DE EXTRACTOS VEGETALES

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EVALUACION DE LA ACTIVIDAD  CITOTOXICA   DE EXTRACTOS VEGETALES

Jorge-Comas1 & Alejandra Perlaza1

1. estudiantes de biología, facultad de ciencias básicas, universidad del Atlántico Km 7 antigua vía puerto Colombia

RESUMEN

Los cultivos en suspensión  se caracterizan por presentar un número  células  dispersas un medio de cultivo. Normalmente es  necesario determinar  qué  porcentaje de estas células son viables y su concentración ya sea para medir la proporción de células vivas luego de procedimiento, para realizar la  caracterización de líneas celulares o para establecer condiciones reproducibles y la consistencia de un cultivo. En  esta  práctica  se determinó la concentración y viabilidad de una suspensión de células  de insecto  empleando el  método de tinción con azul  de tripan ya que este tiñe  las células que presentan daño en la membrana plasmática diferenciando así entre células viables y no viables. Y  la cámara de Neubauer para contar e inferir el número de células viables, como concentración celular, expresada en células por mililitro.

Palabras  Claves: viabilidad, Citotoxicidad, insecto,conteo,extractos, tripano, hemocitometro.

ABSTRACT

Suspension cultures are characterized by a number dispersed cells culture medium. Normally you need to determine what percentage of these cells are viable and concentration either to measure the proportion of living cells following procedure for the characterization of cell lines or to establish reproducible conditions and the consistency of a crop. In practice the concentration and viability of insect cell suspension was determined using the method of trypan blue staining as this dyed presenting cells plasma membrane damage differentiating between viable and non-viable cells. And Neubauer counting chamber and infer the number of viable cells, such as cell concentration, expressed in cells per milliliter.

Key words: viability, cytotoxicity, insect, counting, extracts, trypan hemocytometer.

INTRODUCCIÓN

 En la   actualidad      son  fundamentales los ensayos de viabilidad  y Citotoxicidad,  además  de  los ensayos   de viabilidad  también  existen  los  de  funcionalidad  celular  estos  permiten    evaluar  las principales funciones  de  los  componentes  celulares tales como:  la integridad  de la membrana celular  a partir  de pigmentos fluorescentes como el diacetato de fluorescina (Rotman y Papermaster, 1966)(Mohr y Trounson,1980)estos   se basan en  tinciones cationicas, y lo que hacen es medir  los cambios del potencial de membrana de las células mediante  microfluorometria  asi  como el pigmento  ester de Rodamina, el cual es fuertemente fluorescente al tener contacto con  la célula , aunque en algunos casos  la  propiedad  de fluorescencia no se da en células  que estén dañadas, por  lo que  la fluorescencia se da extracelularmente. Entre los ensayos de exclusión esta el  colorante orgánico   azul de Tripano (Hoskins  et al., 1956)(Phillips, 1973)(Patterson, 1979) y su efecto característico es el de teñir   células y tejidos muertos (Ehrlich, 1904) de esta  manera  el  Tripan blue  permite  determinar   por  conteo de células no teñidas, el porcentaje de  viabilidad por exclusión de captación debido a que no puede  penetrar   y teñir  las células vivas con membranas integras. También están los ensayos funcionales los cuales  miden el ATP, tasas  de ADN   y síntesis de proteínas, además de ensayos de  viabilidad  a  través  de   biosensores de  fluorescencia, morfología  celular , microanálisis  por energía dispersiva de  rayos x  e incluso hasta la determinación  de la expresión génica  de manera global.  Cabe  decir  que  en  los ensayos de viabilidad  celular  y citotoxicidad   tienen  una amplia gama  de usos  en las grandes industrias farmacológicos  como el hecho   de evaluar nuevos medicamentos además de pruebas biológicas que serán imprescindibles  para mejorar  la calidad de los mismos  en el area de la salud, por  otro  lado  se realiza en investigaciones  biológicas y  genéticas  con  cultivos  especiales  celulares de insectos  transmisores de enfermedades  tropicales  en condiciones controladas de laboratorio  los cuales  tienen  nutrientes    especiales vegetales  y proteínicos como el  suero bovino , de esta manera  se pueden  obtener líneas celulares   utilizadas para  generar a su vez  cultivos de Baculovirus los cuales sirven para estudiar más a fondo la biología del virus   y    es  aquí donde entra  en juego  los colorantes  orgánicos  y fluorescentes  los cuales les permite al investigador  estimar  los porcentajes  de viabilidad   y citoxicidad  de  sus células  convirtiéndose  en una  herramienta esencial  para  llevar a  cabo los estudios. Por eso el objetivo  principal de   esta práctica   es  determinar los porcentajes de viabilidad  mediante el conteo de células  de insecto  utilizando el método de Azul de tripano.

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