Los oocitos que se sirven como receptor de la célula donante se obtienen por superovulacion de hembras in vivo o por maduración in vitro de obtenidos por punción folicular o de ovarios de matadero.
Enviado por Erick_loi • 19 de Abril de 2017 • Biografía • 438 Palabras (2 Páginas) • 247 Visitas
Clonación por medio de transferencia celular
- Fuente de oocitos receptores
Los oocitos que se sirven como receptor de la célula donante se obtienen por superovulacion de hembras in vivo o por maduración in vitro de obtenidos por punción folicular o de ovarios de matadero.
“En ovinos se observó que el desarrollo in vitro e in vivo, después de la transferencia a hembras receptoras, es mayor cuando los oocitos utilizados son madurados in vivo”. (Wells y col.97)
El uso de este material es muy costoso comparado con los in vitro.
- Enucleación ovocitaria
Los oocitos maduros poseen una capa granulosa que se remueve para la evaluación morfológica del mismo. El indicador de un oocito maduro es la es la presencia de un citoplasma homogéneo y un corpúsculo polar extruido, esto último es un distintivo e indicativa de la detención de la gameta femenina en meta fase II de meiosis.
“La extrusión del corpúsculo polar se registra en el bovino a partir de la 16h de iniciada la maduración in vitro alcanzando su máx. nivel a los22-24h.”(Campbell y col., 93)
Posterior a su selección los oocitos son incubados en citocalasina B, inhibidor de los microtúbulos dando elasticidad a la membrana celular facilitando la micromanipulación evitando así una lisis celular.
La enucleación involucra la remoción del material genético del oocito receptor mediante pipetas las cuales perforan la zona pelucida y luego se aspira el corpúsculo polar y el citoplasma adyacente.
En las especies de interés zootécnico no se puede observar los cromosomas en metafase así que el corpúsculo polar es una guía orientativa para poder localizar los cromosomas. Una vez obstruido el los cromosomas migran al centro del oocito con el paso del tiempo, por ello deja de ser un indicador eficiente si la maduración se prolonga más de 24h.
La eficiencia de esta depende de la especie, por ejemplo en el conejo hay un alto porcentaje ya que se pueden observar los cromosomas en la pipeta cuando se realiza una aspiración del citoplasma. En especies en las cuales la metafase no se puede observar se realiza una tinción con fluorocromos para ADN como Hoechst 33342.
“La remoción de los cromosomas mecánicamente depriva al oocito de importantes factores citoplasmáticos que pueden reducir la viabilidad y resultar en menor potencial de desarrollo de los embriones después del clonado.”(Westhusin y col., 92)
El núcleo posee un grupo de proteínas secuestras, un activo metabolismo lipídico y sistema para el fostatidilnositol, los componentes no cromosómicos del núcleo juegan un papel importante en el ensamblaje del nucleosoma, estabilidad del “Maturation Promoting Factor, amplificación de la cascada del mismo y un aumento de nivel de este en la transición entre anafase I y Metafase II
...