Adn Recombinante

TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE

ADN recombinante es una molécula que proviene de la unión artificial de dos fragmentos de ADN. Por lo tanto, la tecnología de ADN recombinante es el conjunto de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo, para su posterior manipulación e inserción en otro diferente. De esta manera podemos hacer que un organismo (animal, vegetal, bacteria, hongo) o un virus produzca una proteína que le sea totalmente extraña.

PLÁSMIDOS:

Los plásmidos son pequeñas moléculas de DNA (de 5.000 pb aproximadamente) que se replican en forma autónoma en células bacterianas. Son círculos covalentemente cerrados de DNA de doble cadena. La mayoría de los plásmidos contienen genes resistentes a antibióticos, los que permiten el crecimiento de células bacterianas refugiando a los plásmidos bajo condiciones selectivas. Contienen uno o más genes de resistencia a antibióticos y son capaces de autor replicarse, ya que contienen una secuencia de iniciación. Esto les permite replicarse de manera independiente del ADN genómico. Debido a su tamaño relativamente pequeño, los plásmidos contienen solo algunos únicos sitios de clivaje de enzimas de restricción.

ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

Llamados también endonucleasas de restricción. Reconocían el ADN extraño y lo degradaba mientras que el ADN de la propia cepa se mantenía intacta. Reconoce las secuencias de las bases nitrogenadas en el ADN y, si este no se modifica, hidrolizara el esqueleto de Azúcar-Fosfato. Cada especie bacteriana tiene una encima de restricción se reconoce una secuencia diferente, y en algunos casos posee más de una. Cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los extremos cohesivos o adherentes son generados cuando la enzima corta las dos hebras asimétricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarias entre sí. Los extremos cohesivos o adherentes son particularmente útiles en la construcción de moléculas de ADN híbridas o quiméricas.

CLONACION

Esta es una manera relativamente eficaz de obtener millones de copias del ADN incorporado. Dado que todas las copias del gen provienen de una sola molécula multiplicada a partir de una única bacteria que dio origen a la colonia, esta técnica lleva el nombre de clonación.

Para clonar genes específicos se puede preparar una biblioteca genómica que consiste en una colección de fragmentos de DNA genómicos, clonados en vectores (plásmidos, bacteriófagos o cósmidos), que representan el genoma entero del organismo

El DNA extraño clonado que está en esta biblioteca son moléculas de DNA de doble cadena sintetizadas por la enzima transcriptasa inversa a partir de la población de RNA mensajeros, moldes encontrados en un tejido específico. Así una biblioteca cDNA contiene regiones clonadas codificantes para todas las proteínas expresadas en un tejido particular y variará de tejido en tejido.

REACCION DE LAS CADENAS DE POLIMERASA. ( PCR)

Tiene especial significado en clonación de genes. Mediante esta técnica se amplifica un gen o fragmento de ADN, es decir, que se produce un gran número de copias. También puede realizarse una amplificación de ARN utilizando un ADN complementario de ARN. Para este proceso se necesita la acción de la enzima transcriptasa inversa.

Las aplicaciones de esta técnica son, por ejemplo,

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