Aglutinaciom

Introducción

En el pasado laboratorio se realizo el práctico de aglutinación, donde se realizaron dos pruebas las cuales fueron realizadas por los alumnos y supervisados por el profesor. La primera prueba fue la determinación de factor reumatoideo (FR) y la segunda fue la determinación de grupo sanguíneo. Ambas técnicas por aglutinación directa en placa.

Las muestras utilizadas para determinar el factor reumatoideo son sueros problema, que presentan artritis reumatoide y mediante esta prueba se logra diagnosticar. El resultado es positivo cuando se observa aglutinación.

Para la determinación de grupo sanguíneo el procedimiento es similar.

En la interacción in Vitro de un Ag con su correspondiente Ac se distinguen 2 etapas: la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación. Por otro lado, no siempre que se produce la interacción primaria Ag-Ac, se produce la interacción secundaria, ya que, para conseguir fenómenos visibles, son indispensables determinadas concentraciones y características de los Ags y Acs.

Los principios físico-químicos que gobiernan la formación de estos aglutinados son los mismos que gobiernan la formación de un precipitado. La gran diferencia entre las reacciones de precipitación y de aglutinación son las características del antígeno: mientras que en las reacciones de precipitación se emplean antígenos solubles, en las reacciones de aglutinación el Ag es participado.

Antígeno es una sustancia de alto peso molecular, con cierta rigidez estructural y que tiene la particularidad de ser parcialmente “metabolizado” por células especializadas llamadas macrófagos, por lo tanto es capaz de generar una respuesta inmune en un organismo que la detecte como un agente extraño. Mientras que un anticuerpo es una glicoproteína, producida por linfocitos B activados, llamados células plasmáticas, como respuesta a la presencia de un antígeno en el organismo

Factor reumatoide es un auto anticuerpo con especificidad para determinantes antigénicos del fragmento Fc de inmunoglobulina G humana y de ciertos animales.

Existe Factor reumatoideo de las tres clases de inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM. Las más comunes son clase IgG e IgM.

objetivos

1. Determinar mediante la reacción de aglutinación Factor Reumatoideo utilizando partículas de Látex, en muestras problema

2. Determinar por la técnica de aglutinación nuestro grupo sanguíneo

3. familiarizarse con los métodos expuestos en este laboratorio

materiales utilizados:

• Kit Factor Reumatoide

• Kit de antisueros para determinar grupo ABO y RH

• Micropipeta de 10uL-100uL

• Puntas desechables amarillas

• Tubos de Khan 75x13 mm

• Placas vidrios o de cartón para realizar la reacción de aglutinación

• Cronómetro

• Guantes

Método utilizado

Para la determinación de factor reumatoideo en las muestras se utilizo la detección cualitativa y semicuantitativa in vitro de factores reumatoides (FR) en suero humano. El cual en su contenido esta:

• reactivo de látex

• control positivo

• control negativo

• palillos

• portas (placa) desechable

como información general decir que el método tiene como nombre aglutinación en látex y su interpretación es visual. mencionar que todos los reactivos del kit están listo para su uso y son estables hasta la fecha de caducidad indicada, y no congelar ya que altera de manera irreversible la función de los reactivos. indicaciones de deterioro de los reactivos es la presencia de partículas y turbidez.

Factor reumatoide es un autoanticuerpo con especificidad para determinantes antigénicos del fragmento Fc de inmunoglobulina G humana y de ciertos animales.

Existe Factor reumatoideo de las tres clases de inmunoglobulinas IgG, IgA, IgM. Las más comunes son clase IgG e IgM.

Fundamentos del Método

El FR se detecta mediante una reacción Antígeno-Anticuerpo de aglutinación en placa. El reactivo de látex consiste en una suspensión de partículas de látex estabilizadas con albúmina, a estas partículas están unidas químicamente gammaglobulinas humanas desnaturalizadas, que una vez en contacto con el suero del paciente se produce la reacción (Ag - Ac), visualizándose una aglutinación macroscópica.

Precauciones

Los reactivos provistos son para uso diagnóstico “in Vitro”. Los controles han sido ensayados para HIV y HBV, encontrándose no reactivos. No obstante deben ser empleados como si se tratara de material infectivo... Debe usar sus accesorios estándar de protección de bioseguridad (Guantes, Delantal, Anteojos de seguridad)

importante recordad que la dilución de trabajo es 1/2

Procedimiento y control de calidad utilizado

1 Para ambas experiencias llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente antes de usar. Agitar el reactivo de látex antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero.

2 Crear hoja de trabajo para registrar sus resultados

3 Agregar 25 uL de la muestras o controles.( Colocar en el primer pocillo de la placa 25 ul del control negativo, en el segundo pocillo colocar 25 ul del reactivo de control positivo en los pocillos siguientes agregar las muestras a estudiar

4 Agregar 25 uL de reactivo de Látex a cada uno de los pocillos

5 Mezclar con un palillo desechable hasta obtener una suspensión uniforme en toda la superficie del círculo.

6 inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y observar macroscópicamente el resultado bajo un haz luminoso dentro de los 2 minutos siguientes.

7 Registrar sus resultados negativos y controles.

8 Titular a punto final sus muestras positivas con diluciones seriadas en múltiplo de 2 y hacer reaccionar cada una de estas diluciones con el reactivo de látex e informar titulo final

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