Aminoacidos

Aminoácidos

Resumen

En este práctico se trabajó en la identificación de aminoácidos por medio de reacciones coloreadas de carácter cualitativo, basados en las reacciones de los grupos funcionales.

Para empezar se realizó una curva de titulación con respecto a la variación del pH de aminoácido Glicina de pH ácido al adicionar alícuotas de una base fuerte (NaOH). Además se realizaron tres pruebas para identificación de aminoácidos; 1) Prueba de Ninhidrina: la cuál identificó la presencia de aminoácidos con al menos un grupo amino y un carboxilo, dando como resultado positivo aquel que dio una coloración púrpura. 2) Prueba de Millon: los compuestos que contienen radical hidroxibenceno reaccionan con esta prueba dando como resultado una coloración roja. 3) Prueba de Pauly: el ácido sulfanílicodiazotizado se une con aminas, fenoles e imidazoles los cuales forman compuestos azo fuertemente coloreados, éstas reacciones se realizan en frío.

Objetivos.

- Conocer la estructura de los 20 aminoácidos proteicos.

- Obtención de curva de titulación del aminoácido glicina

- Identificar los diferentes aminoácidos que reaccionan con su respectiva prueba (reacción de nihidrina, millon y Pauly)

Resultados

Actividad 1: titulación de un aminoácido

Tabla 1: volumen de NaOH adicionado versus pH del aminoácido acido glicina

Volumen de NaOH (mL) 0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0

Moles de NaOH adicionados 0 0,005 0,01 0,015 0,02 0,025 0,03 0,035 0,04 0,045 0,05

pH aminoácido 2,79 2,88 3,04 5,02 6,86 7,63 7,83 8,11 8,28 8,39 8,46

Anexo: grafico de curva de titulación en papel milimetrado, al final de resultados

Tabla 2: reacción de la Ninhidrina

Aminoácido Color

Glicina Purpura medio

Tirosina Purpura medio

Histidina Purpura oscuro

Triptófano Purpura claro

Arginina No reacciona

Agua No reacciona

Tabla 3: reacción de millón

Aminoácidos Color

Glicina No reacciona

Tirosina Rojo oscuro

Histidina No reacciona

Triptófano Amarillo fuerte

Arginina Amarillo claro

Fenol Rojo oscuro

Tabla 4: prueba de Pauly

Aminoácidos Color

Glicina Amarillo claro

Tirosina Rojo

Histidina Naranjo oscuro

Triptófano Amarillo oscuro

Arginina Amarillo

Discusión

La titulación de un aminoácido es un proceso de intercambio de protones, en donde se protona y se desprotona gracias a los ácidos (H+) y las sales (OH-), respectivamente. De esto se desprende que “a pH muy bajo, la especie iónica predominante del aminoácido es H3N+-CH2-COOH, la forma totalmente protonada” (Lehninger 2000, p.123).

En la curva de titulación se diferencian dos puntos importantes. En el punto medio de cualquier valoración se alcanza un punto de inflexión en el cual el pH es igual pKa1 del grupo protonado que se está valorando. Para la Glicina el punto medio es 3,72 y por lo tanto su grupo –COOH tiene un pKa1 de 3,72. La segunda etapa de la valoración corresponde a la eliminación de un protón del grupo –NH3+ de la Glicina, el pH en el punto medio de esta etapa es de 8,25 igual al pKa2 del grupo del -NH3+. A medida que avanza la valoración se alcanza otro lugar importante llamado punto isoeléctrico (pI), en donde el 100% del aminoácido se encuentra como dipolo, las cargas eléctricas netas son cero, y esta fase es llamada también zwitterion. El valor que toma este punto para la Glicina es de 5,99 con el promedio de los pKas obtenidos.

En la Reacción de Ninhidrina, se tiene como antecedente que esta reacciona con todos los aminoácidos a un pH fisiológico entre 4 y 8, por

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