Analisis Cloroplastos

El procedimietno de la practica 8 “Cloroplastos” se realizo de manera adecuada tal y como esta descrito en el manual de biologia celular.

Para la obtención de los cloroplastos aislados se recurrió a la tencica de fraccionamiento celular en donde se realizo una centrifugación diferencial. En ella la mezcla 2:1 del buffer de fosfatos a la 0.02M pH 8 con la solución de NaCl 0.35M fue para, en el caso del buffer de fosfatos, amortiguar los cambios bruscos que ocurren en el medio extra e intra celular; esto lo hace cediendo o recibiendo electrones rápidamente lo cual ayuda a evitar cambios briscos de pH, y en el caso de la solución salina su función fue la de estabilizador.

Las capas de aceite usadas fueron para aislar los cloroplastos del O2 presente en la atmosfera.

En la fotosíntesis los Cloroplastos reducen al NADP y lo transforman en NADPH durante la fase luminosa. En la fase luminosa es donde la energía lumínica captada por los cloroplastos, se convierte en energía química. La reducción del NAD ocurre de la siguiente manera: El NADP experimenta reducción reversible del anillo de la nicotinamida este se reduce a NADPH+H+ aceptando un ion hidruro (dos electrones y un protón) a partir de un sustrato oxidable. El ion hidruro se puede adicionar en la parte frontal o posterior de la carga positiva del átomo del nitrógeno del anillo plano de la nicotinamida. El segundo protón eliminado del sustrato se libera al disolvente acuoso. La reacción es:

NADP+ + 2e- + 2H+ → NADPH + H+

En nuestro experimento durante la preparación de los 6 tubos que se sometieron a las 3 condiciones lumínicas diferentes (3 tubos como muestras blanco y 3 tubos como muestras problema), se adiciono el 2,4-Diclorofenolindofenol 1X10-5 M, este compuesto organico es el que se uso como sustituto para comprobar la capacidad reductora de los cloroplastos, pasando del 2,4-Diclorofenolindofenol al 2,4-Diclorofenolindofenol reducido como se muestra en la siguiente imagen:

Entonces en base a esto se usara el 2,6-diclorofenolindofenol como aceptor artificial de protones ocacionando asi su reduccion

Nuestros resultados de cada condición luminica se muestran en la tabla 1.

Durante la condición de oscuridad en la que se sometió nuestros tubos 1A y 2 observamos que nuestra muestra problema (tubo 2) no hubo ningun indicio de cambio aparente, esto es debido a que la actividad de los cloroplastos solo se realiza en prescencia de luz, y la muestra al carecer de ella, no dio paso a cambio alguno.

Durante la condición de luz artificial en la que se sometió nuestros tubos 1B y 3 observamos el cambio de color a un verde mas intenso, esto debido a que este tipo de luz presenta una intensidad muy fuerte ocasionando que la actividad reductiva de los cloroplastos se magnificara

Durante la condición de luz natural a la que se sometieron los tubos 1C y 4 se observo un color verde mas débil

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