Apuntes bioquimica. Choque osmótico

Choque osmótico:

El medio hipotónico es el que da lugar al rotura de las estructuras. Se usa en células sin pared celular.

Congelación-descongelación:

Debemos realizar ciclos sucesivos para evitar la formación de cristales que pueden causar daños mecánicos y osmóticos. La congelación se lleva a cabo con nitrógeno líquido o nieve carbónica, CO2 en estado sólido, (hielo seco). Es útil para tejidos blancos. No confuncir con crioproteccion.[pic 1]

Detergentes:

Son moléculas anfipáticas capaces de formar micelas en agua

Tipos:

• Iónicos: cabeza con carga: acción desnaturalizante
• No iónicos: cabeza sin carga: no acción desnaturalizante

Lisis alcalina:

Se usa para obtener ADN plasmídico en bacterias. Para ello provocamos la desnaturalización del ADN con SDS y NaOH. Si nos interesa la renaturalización usamos acetato potásico.

Solventes orgánicos:

Tienen bajo peso molecular, son volátiles y líquidos a temperatura ambiente. Solubilizan las membranas celulares y son desnaturalizantes

Enzimas:

Nos ayudan a degradas paredes celulares. Según el tipo de pared usamos distintas enzimas:

• Bacterias:

• Gram +: lisozima
• Gram -: 1º EDTA 2ª lisozima

• Levaduras: Zymaliasa/liticasa

• Hongos: zymaliasa/liticasa + quitinasa

• Plantas: celulasa y pectinasa

Agitación con agresivos:

Son balas de vidrio, arena, tierra de diatomea…Debemos controlar la velocidad, concentración, concentración de las bolas de vidrio, diámetro de las bolas, temperatura, etc. Es muy útil en levaduras y tejidos deshidratantes. Funcionan debido a los cambios bruscos de presión que ocasionan rotura.

Si queremos usar arena o tierra la muestra debe estar congelada porque lo usaramos con un mortero de cerámica.

Sonicación (ultrasonidos)

Ejerce altas presiones transitorias por vibración ultrasónica. Es muy útil en bacterias y levaduras. Desventajas: grandes cantidades de calor y espuma en la superficie

Cavitación: creación de microburbujas que aumentan su tamaño hasta explotar y crear alta presión.

Prensas:

Hay de dos tipos: de Frenh y de Eaton. Someten a la muestra a altas presiones para que pase por unos pequeños orificios, lo que ocasiona un cambio brusco de presión y cizamientos.

Homogenizador de aspa:

Costa de hojas propulsadas a gran velocidad.

Polytron: sustancias blandas

Embolo de Potter:

Mano de almirez propulsada mecánicamente, lo que ocasiona un movimiento vertical y un giro sobre si mismo. Se usa en tejidos blandos.

Concentración:

Finalidad: disminuir el volumen de la muestra:

• Por precipitación:  (problema: añadimos algo a la muestra)

-Provocar que las moléculas precipiten para después resuspednder en volumen menor que el volumen inicial.

-No varia la estructura de las proteínas

-Capa o atmosfera de solvatación: moléculas de agua en la superficie de las proteínas

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