BIOLOGÍA CELULAR Práctica 5. Frotis Sanguíneo y Tinción de Wright.

BIOLOGÍA CELULAR

 Práctica 5. Frotis Sanguíneo y Tinción de Wright.

OBJETIVO

El alumno aprenderá a realizar un frotis sanguíneo, y a teñirlo con la tinción de Wright para  identificar las diferentes células sanguíneas.

MATERIAL

• Alcohol metílico.
• Algodón.
• Portaobjetos.
• Tinción de Wright.
• Guantes.
• Microscopio.
• Cubetas para la tinción.

INTRODUCCIÓN

El frotis sanguíneo es la extensión de sangre periférica realizada sobre un portaobjetos, la cual es teñida para la observación de células sanguíneas al microscopio. La sangre periférica es aquella sangre obtenida a partir de las extremidades o áreas alejadas del corazón (dedos de las manos, oídos y planta de pies).

Dentro de las tinciones para células de sangre, la  Tinción de Wright es una de las más empleadas. La tinción de Wright fue diseñada por el patólogo James Homer Wright en 1902 a partir de la modificación de la ya existente tinción de Romanowsky, utilizada para diferenciar elementos de la sangre. La tinción de Wright es clasificada como una tinción policromática, dado  que puede teñir compuestos ácidos o básicos presentes en una célula.

El reactivo de Wright está compuesto por eosina y azul de metileno, La eosina es un colorante que tiene afinidad por los componentes alcalinos. Existen dos compuestos como eosina y que están intrínsecamente relacionados: eosina Y, conocida también como tetrabromofluoresceína o eosina amarilla, y la eosina B, conocida como dibromodinitrofluoresceína o eritrosina B azulada. La eosina Y es la más utilizada en procedimientos rutinarios.  Las estructuras con carácter ácido, tales como, los ácidos nucleicos o las proteínas ácidas son afines por compuestos básicos como lo es el azul de metileno. Por el contrario, las estructuras de carácter básico, tales como, la hemoglobina y otras proteínas básicas son afines a compuestos ácidos, tales como, la eosina por lo que estas estructuras tendrán un color rojo-rosado. En el caso de las células sanguíneas, la tinción de Wrigth tiñe de color rosa el citoplasma de las células, y color púrpura los núcleos o gránulos neutrofílicos.

METODOLOGÍA

PUNCION CAPILAR

1. La persona quién realizará la punción capilar deberá lavarse las manos con agua y jabón y colocarse los guantes.
2. Posteriormente, se debe calentar con suaves masajes el dedo seleccionado para la punción. NOTA: En todo momento el paciente debe tener su brazo por debajo de su cintura.
3. Sujetar y hacer presión con dos dedos sobre el dedo índice del paciente y desinfectar el área con una torunda con alcohol.
4. Hacer la punción introduciendo una lanceta rápida, firme y perpendicularmente al lateral externo del dedo índice (la punción debe hacerse en un solo paso lo más rápido posible, NOTA: No dar vuelta  ala lanceta dentro del dedo ya que esto producirá un hematoma).
5. Presionar de forma intermitente el dedo para favorecer la formación de la gota de sangre.
6. La primera gota de sangre se descartará debido a que contiene líquido tisular, para eliminarla es necesario limpiar dicha gota con una torunda nueva con alcohol.
7. Siga presionando el dedo para que la formación de una segunda gota de sangre.
8. Una vez formada la gota de sangre debe colocarse 2 gotas sanguíneas en el extremo de un portaobjetos limpio.
9. Colocar al paciente una torunda con alcohol en el sitio de punción y hacer presión por 1 min para que pare el sangrado.

 FROTIS SANGUÍNEO

1. Extender la gota de sangre colocada en el portaobjetos con uns egundo portaobjetos siguiendo los siguientes pasos:

• Tomar el portaobjetos lateralmente entre las yemas de los dedos a 45°, deslizarlo

sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre que contenga las partes de un frotis bien definidas:  cabeza, cuerpo y cola (VER FIGURAS ANEXAS DE FROTIS).

• Esperar a que se seque la lámina. NO calentar.

Partes de un frotis sanguíneo

• Cabeza. Es la parte donde se colocó la gota de sangre, tiene gran concentración de los eritrocitos y linfocitos.
• Cuerpo. Parte media de un frotis, esta parte se emplea para la evaluación microscópica.
• Cola. Zona final del frotis, esta zona se encuentra diluida, la morfología de las células se ve alterada. Hay gran concentración de plaquetas, monocitos y neutrófilos.

TINCIÓN CON WRIGHT

1. Colocar el colorante de Wright homogéneamente sobre el frotis sanguíneo y deje que el colorante actue por 5 minutos. Nota: Si empieza a evaporar el colorante durante los 5 minutos agregue más colorante.
2. Después agregar agua destilada sin eliminar el colorante hasta que este obtenga un brillo metálico.
3. Dejar incubando a temperatura ambiente por 10-15 minutos.
4. Lavar con agua corriente hasta que el frotis presente un color rosado.
5. Dejar secar el frotis colocandolo en posición vertical sobre un papel secante.
6. Agregar una gota de aceite d einmersión y observar en forma de zig-zag en el microscopio con el objetivo de 100X (VER FIGURA).
7. Cuantificar 100 globulos blancos e indicar que porcentaje de linfocitos, monocitos, leucocitos, neutrófilos segmentados y neutrófilos en banda hay en esas 100 células cuantificadas.

TABLA DE VALORES NORMALES DE CÉLULAS SANGUÍNEAS

NOTA: Estos valores pueden variar dependiendo del instrumento con el que se hagan las mediciones, por lo cual cada laboratorio maneja sus valores de referencia.

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